yi蛋白酶（Trypsin）试剂盒说明书

微量法 100T/96S

正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定测定意义：

yi蛋白酶选择性水解变性蛋白质中由赖an酸或精an酸的羧基所构成的肽链，是一种重要的消化酶。此外，yi蛋白酶还广泛应用于脓胸、血胸、外科炎症、溃疡、创伤性损伤等所产生的局部水肿、血肿及脓肿等的辅助治疗。

测定原理：

yi蛋白酶催化水解TAME 的键，释放出的游离羧基与反应体系中的氢氧化钠发生中和反应，导致溶液的pH 值降低，以ben酚红为指示剂，测定溶液在 555nm 处吸收值的变化，可以快速测得yi蛋白酶活性数据。yi蛋白酶在一定范围内与 555nm 处吸收值的降低呈良好的线性关系。

胰蛋bai酶（Trypsin）试剂盒 蛋白酶系列

组成：

自备仪器和用品：

酶标仪、96 孔板、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、研钵、冰和蒸馏水。

具体产品的参数以收到产品说明书的参数为准

粗酶液提取：

1、 组织样品：

按照组织质量（g）：提取液体积(ml)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1ml 提取液）冰浴匀浆，10000g，4℃离心 10min，取上清，即粗酶液。

测定步骤：

1. 酶标仪预热 30 min，调节波长到 555 nm。

2. 工作液的配制：临用前根据用量按照试剂一（V）：试剂二（V）：蒸馏水（V）：试剂三（V）=1 ml：1 ml：5.4 ml：0.4 ml 的比例充分混合。（注意：现用现配，用多少配多少，在空瓶中配制，试剂盒中带有4 个空瓶）

3. 吸取5ul样本，加入195 ul工作液，混匀后立即测定，记录555nm下1min时的吸光值A1和2min时的吸光值 A2。计算△A=A1-A2

注意：如果△A小于0.005，可将反应时间延长到5min。如果△A大于0.5，体系迅速变色，可将样本用提取液稀释后测定（建议稀释10倍），计算公式中乘以相应稀释倍数。

yi蛋白酶活性计算公式：

使用 96 孔板测定的计算公式如下

（1） 按蛋白浓度计算

活性单位定义：室温下每毫克蛋白质每分钟催化 555nm 处吸光值减少 0.5 为 1 个酶活单位。yi蛋白酶（U/mg prot）= △A ×V 反总 ÷（Cpr×V1）÷0.5÷T

=80×△A ÷Cpr

（2） 按样本质量计算

活性单位定义：室温每克组织每分钟催化 555nm 处吸光值减少 0.5 为 1 个酶活单位。yi蛋白酶（U/g 鲜重）= △A×V 反总÷（W×V1÷V2）÷0.5÷T

=80×△A ÷W

Cpr：粗酶液蛋白质浓度（mg/ml），需要另外测定；W：组织质量（g）；V1：加入反应体系中粗酶液体积（ml），5 ul=0.005 ml；V2：粗酶液总体积（ml），1 ml；V 反总：反应总体积，0.2 ml；T：反应时间（min），1 min。

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