His-Tag（组氨酸标签）是一种广泛应用于重组蛋白表达和纯化的技术。通过在目标蛋白的N端或C端添加6个连续的组氨酸残基（HHHHHH），可以利用金属离子（如镍或钴）的亲和作用实现目标蛋白的高效纯化。His-Tag蛋白纯化磁珠因其高效、便捷和高特异性，成为实验室和工业生产中的常用工具。 一、工作原理
His-Tag蛋白纯化磁珠基于金属离子亲和层析（IMAC）原理。磁珠表面的配体（如NTA-Ni²⁺或IDA-Ni²⁺）与His-Tag中的组氨酸残基具有高度亲和力。在适当的缓冲液条件下，His-Tag蛋白与磁珠结合，而其他杂质则被洗脱。通过调整缓冲液中的咪唑浓度，可以实现目标蛋白的特异性洗脱。
二、纯化步骤
1、准备样品
（1）裂解细胞：根据目标蛋白的表达系统，选择合适的裂解方法。例如，细菌细胞可以通过超声波裂解，哺乳动物细胞可以通过温和的裂解缓冲液处理。
（2）去除杂质：通过离心或过滤去除细胞碎片和其他大颗粒杂质。
2、磁珠准备
（1）重悬磁珠：轻轻吹打磁珠，使其均匀悬浮。
（2）洗涤磁珠：用平衡缓冲液（如20 mM Tris-HCl, pH 7.4）洗涤磁珠，去除保存液。
3、结合
（1）混合样品和磁珠：将裂解后的样品与磁珠混合，轻轻搅拌以促进结合。
（2）孵育：在适当的温度（通常为4°C）下孵育30分钟至1小时。
4、洗涤
（1）去除未结合蛋白：使用磁力架分离磁珠，去除上清液。
（2）洗涤磁珠：用洗涤缓冲液（如20 mM Tris-HCl, 30 mM咪唑, pH 7.4）洗涤磁珠，重复3-5次。
5、洗脱
（1）洗脱目标蛋白：用洗脱缓冲液（如20 mM Tris-HCl, 500 mM咪唑, pH 7.4）洗脱目标蛋白。
（2）收集洗脱液：将洗脱液收集于新的离心管中。
三、技术优势
1、高特异性：His-Tag与磁珠表面的金属离子具有高度特异性结合，可有效去除杂质。
2、高载量：每毫升磁珠可结合超过20 mg的His-Tag融合蛋白。
3、快速便捷：整个纯化过程可在1小时内完成，无需复杂的柱层析操作。
4、兼容性强：适用于多种表达系统和蛋白类型，包括N端和C端His-Tag蛋白。
四、注意事项
1、缓冲液选择：避免使用含有EDTA、EGTA等螯合剂的缓冲液，以免影响磁珠性能。
2、咪唑浓度：根据目标蛋白的特性，优化咪唑浓度以提高纯化效率。
3、磁珠保存：使用后应立即用保护液重悬并保存于2-8°C。
His-Tag蛋白纯化磁珠是一种高效、便捷的纯化工具，适用于多种实验室和工业应用场景。通过优化纯化步骤和条件，可以实现高纯度、高得率的目标蛋白纯化。
