胃蛋bai酶（Pepsin）试剂盒说明书

微量法 100T/48S

正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定测定意义：

胃蛋bai酶由胃粘膜主细胞分泌，分解食物中蛋白质成小肽段。一般用于神经性低酸症的鉴别，慢性胃炎、慢性胃扩张、慢性十二指肠炎等症状时也会引起胃蛋bai酶分泌的减少。

测定原理：

胃蛋bai酶可催化血红蛋白水解，水解产物与福林试剂反应后显蓝色；一定范围内，其颜色的深浅与胃蛋bai酶活性呈正比。

胃蛋bai酶（Pepsin）试剂盒 常备现货

组成：

试剂三：粉剂×1 瓶，4℃避光保存。临用前加入 10ml 试剂二充分溶解。试剂四：粉剂×1 瓶，4℃保存。临用前加入 10ml 蒸馏水充分溶解。

试剂五：粉剂×1 瓶，4℃保存。临用前加入 15ml 蒸馏水充分溶解。

标准品：液体 1.27ml×1 支，0.5μmol/ml 酪an酸标准溶液浓度 4℃保存。

具体产品的参数以收到产品说明书的参数为准

自备仪器和用品：

可见分光光度计/酶标仪、微量玻璃比色皿/96 孔板、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、研钵、冰和蒸馏水。

粗酶液提取：

组织样品：按照组织质量（g）：试剂一体积(ml)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1ml 试剂一）冰浴匀浆，8000g，4℃离心 10min，取上清，即粗酶液。

测定步骤：

1、分光光度计预热 30min 以上，调节波长至 580nm，蒸馏水调零。

2. 试剂三和试剂四置于 37℃水浴预热 30min。

3. 标准管：取微量玻璃比色皿/96 孔板，加入 20μl 标准品，40μl 试剂二，120μl 试剂五，20μl 试剂六，混匀后室温静置 20min，于 580 nm 测光吸收，记为 A 标准管。

4. 空白管：取微量玻璃比色皿/96 孔板，加入 20μl 蒸馏水，40μl 试剂二，120μl 试剂五，20μl 试剂六，混匀后室温静置 20min，于 580 nm 测光吸收，记为 A 标准空白管。

5. 对照管：取 EP 管，加入 100 μl 蒸馏水，置于 37℃水浴保温 10min；加入 100μl 试剂四，盖紧后摇匀1min；加入 20μl 粗酶液，混匀后 8000g 4℃离心 10 分钟取上清；在微量玻璃比色皿/96 孔板加入上清液 20μl，再加入 40μl 试剂二，120μl 试剂五，20μl 试剂六，混匀后室温静置 20min，于 580 nm 测光吸收，记为 A 空白管。

6. 测定管：取 EP 管，加入 20μl 粗酶液，100μl 试剂三，置于 37℃水浴保温 10min；加入 100μl 试剂四，

盖紧后摇匀 1min；8000g 4℃离心 10 分钟取上清；在微量玻璃比色皿/96 孔板加入上清液 20μl，再加入 40μl试剂二，120μl 试剂五，20μl 试剂六，混匀后室温静置 20min，于 580 nm 测光吸收，记为 A 测定管。

注意：空白管和标准管只需要测定一次。

计算公式：

a. 使用微量玻璃比色皿测定的计算公式如下

（1） 按蛋白浓度计算

活性单位定义：37℃每毫克蛋白每分钟催化血红蛋白水解生成 1nmol 酪an酸为 1 个酶活单位。

胃蛋bai酶活性（nmol/min/mg prot）= C 标准品×（A 测定管－A 对照管）÷（A 标准管－A 空白管）×稀释

倍数÷（Cpr×V1）÷T

=27500×（A 测定管－A 对照管）÷（A 标准管－A 空白管）÷Cpr

（2） 按样本质量计算

活性单位定义：37℃每克组织每分钟催化血红蛋白水解生成 1nmol 酪an酸为 1 个酶活单位。

胃蛋bai酶活性（nmol/min/g 鲜重）= C 标准品×（A 测定管－A 对照管）÷（A 标准管－A 空白管）×稀释

倍数÷（W×V1÷V2）÷T

=27500×（A 测定管－A 对照管）÷（A 标准管－A 空白管）÷W

C 标准品：标准品浓度，0.5 μmol/ml 酪an酸；稀释倍数：（20+100+100）÷20=11；Cpr：粗酶液蛋白质浓度（mg/ml），需要另外测定；V1：加入反应体系中粗酶液体积（ml），20μl=2×10-2ml；W：组织质量（g）； V2：粗酶液总体积（ml），1ml；T：催化反应时间（min），10min。

b. 使用 96 孔板测定的计算公式如下

（（1）按蛋白浓度计算

活性单位定义：37℃每毫克蛋白每分钟催化血红蛋白水解生成 1nmol 酪an酸为 1 个酶活单位。

胃蛋bai酶活性（nmol/min/mg prot）= C 标准品×（A 测定管－A 对照管）÷（A 标准管－A 空白管）×稀释

倍数÷（Cpr×V1）÷T

=27500×（A 测定管－A 对照管）÷（A 标准管－A 空白管）÷Cpr

（2）按样本质量计算

活性单位定义：37℃每克组织每分钟催化血红蛋白水解生成 1nmol 酪an酸为 1 个酶活单位。

胃蛋bai酶活性（nmol/min/g 鲜重）= C 标准品×（A 测定管－A 对照管）÷（A 标准管－A 空白管）×稀释

倍数÷（W×V1÷V2）÷T

=27500×（A 测定管－A 对照管）÷（A 标准管－A 空白管）÷W

C 标准品：标准品浓度，0.5 μmol/ml 酪bai酸；稀释倍数：（20+100+100）÷20=11；Cpr：粗酶液蛋白质浓度（mg/ml），需要另外测定；V1：加入反应体系中粗酶液体积（ml），20μl=2×10^-2ml；W：组织质量（g）； V2：粗酶液总体积（ml），1ml；T：催化反应时间（min），10min。

注意事项

试剂三、试剂四、试剂五临用前配制，配制好用不完的试剂 4℃可保存一周。

胃蛋bai酶（Pepsin）试剂盒 常备现货