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磷脂酶C（ Phospholipases C，PLC ）试剂盒说明书
分光光度法 50 管/48 样
磷脂酶C（EC 3.1.4.3）是一种水解甘油磷酸酯 C3 位点甘油磷酸酯键的脂类水解酶，广泛存在于微生物及动植物的组织和细胞中，在细胞代谢、细胞传递、生长发育等方面具有重要作用。
磷脂酶C 催化水解NPPC 产生对硝基ben酚，在 410nm 处有特征吸收峰。
产品名称 | BR6027-50T/48S | Storage |
提取液：液体 | 50ml | 4℃ |
试剂一：液体 | 55ml | 4℃ |
试剂二：液体 | 25ml | 4℃避光 |
试剂三：液体 | 20ml | 4℃ |
说明书 | 一份 | |
自备仪器和用品：
天平、研钵、超速冷冻离心机、可见分光光度计、1 ml 玻璃比色皿、恒温水浴锅。
具体产品的参数以收到产品说明书的参数为准
1. 组织：按照质量（g）：提取液体积(ml)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g，加入 1ml 提取液）加入提取液，冰浴匀浆后于 4℃，10000g 离心 5min，取全部上清于 4℃、100000g 离心 30min，弃上清，取沉淀溶于 1ml 试剂一。
2. 细胞：按照细胞数量（104 个）：提取液体积（ml）为 500~1000：1 的比例（建议 500 万细胞加入 1ml提取液），冰浴超声波破碎细胞（功率 300w，超声 3 秒，间隔 7 秒，总时间 3min）；然后于 4℃，10000g离心 5min，取全部上清于 4℃、100000g 离心 30min，弃上清，取沉淀溶于 1ml 试剂一。
3. 血清：直接测定。
空白管 | 测定管 | |
样品（μl） | 100 | |
试剂一（μl） | 100 |
试剂二（μl） | 500 | 500 | ||
充分混匀，37℃反应 30min | ||||
试剂三（μl） | 400 | 400 | ||
充分混匀，于 1ml 玻璃比色皿，蒸馏水调零，测定 410nm 处吸光值，分别记为 A 空白 管和A 测定管，△A=A 测定管-A 空白管。 | ||||
酶活计算公式：
标准曲线：y = 0.0191x - 0.0103，R2 = 0.9991
1. 按照蛋白浓度计算
酶活性定义：每毫克蛋白每分钟水解NPPC 产生 1nmol 对硝基ben酚所需的酶量为一个酶活力单位。
PLC 活性（nmol/min/mg prot）=（△A+0.0103）÷ 0.0191×V 反总÷(V 样×Cpr) ÷T
= 17.45×（△A+0.0103）÷ Cpr
2. 按照样本质量计算
酶活性定义：每克组织每分钟水解NPPC 产生 1nmol 对硝基ben酚所需的酶量为一个酶活力单位。
PLC 活性（nmol/min/g 鲜重）=（△A+0.0103）÷ 0.0191×V 反总÷(V 样÷V 样总×W) ÷T
= 17.45×（△A+0.0103）÷ W
3. 按照细胞数量计算
酶活性定义：每 104 个细胞每分钟水解NPPC 产生 1nmol 对硝基ben酚所需的酶量为一个酶活力单位。
PLC 活性（nmol/min/104 cell）=（△A+0.0103）÷ 0.0191×V 反总÷(V 样÷V 样总×细胞数量) ÷T
= 17.45×（△A+0.0103）÷ 细胞数量
4. 按照液体体积计算
酶活性定义：每毫升血清每分钟水解NPPC 产生 1nmol 对硝基ben酚所需的酶量为一个酶活力单位。
PLC 活性（nmol/min/ml）= （△A+0.0103）÷ 0.0191×V 反总÷V 样÷T
= 17.45×（△A+0.0103）
V 反总：反应总体积，1ml；V 样：加入样本体积，0.1ml；V 样总：加入提取液体积，1ml；Cpr：样本蛋白浓度，mg/ml；W：样本质量，g；T：反应时间，30min
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