销售咨询热线：
13269190901
磷脂酶A2（phospholipase A2，PLA2）试剂盒说明书
分光光度法 50 管/24 样
磷脂酶A2（EC3.1.1.4）是磷脂sn-2 位脂酰基水解酶，广泛存在于动植物组织、细菌、细胞核分泌物中，参与脂肪消化，精子成熟、细胞信号传递、脂质过氧化修复、宿主反应等生理过程，在控制体内磷脂类物质平衡、调节机体新陈代谢、参与疾病的病理进程等方面发挥着及其重要的作用。
磷脂酶A2 作用于 2-硫代十六酰乙基磷酸dan碱（HEPC）产生游离巯基，与DTNB 反应生成黄色物质，在 412nm 处有特征吸收峰。
产品名称 | BR6029-50T/24S | Storage |
提取液液体 | 50ml | 4℃ |
试剂一：液体 | 50ml | 4℃ |
试剂二：液体 | 50ml | 4℃ |
试剂三：液体 | 5 瓶 | -20℃避光 |
说明书 | 一份 | |
试剂三：液体×5 瓶，-20℃避光保存。临用前根据用量每瓶加入 4.5mL 试剂二充分混匀；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。
具体产品的参数以收到产品说明书的参数为准
天平、超速冷冻离心机、研钵、可见分光光度计、1 ml 玻璃比色皿。
1. 组织：按照质量（g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g，加入 1mL 提取液）加入提取液，冰浴匀浆后于 4℃，10000g 离心 5min，取全部上清于 4℃、100000g 离心 30min，弃上清，取沉淀溶于 1mL 试剂一。
2. 细胞：按照细胞数量（104 个）：提取液体积（mL）为 500~1000：1 的比例（建议 500 万细胞加入 1mL提取液），冰浴超声波破碎细胞（功率 300w，超声 3 秒，间隔 7 秒，总时间 3min）；然后于 4℃，10000g离心 5min，取全部上清于 4℃、100000g 离心 30min，弃上清，取沉淀溶于 1mL 试剂一。
3. 血清：直接测定。
对照管 | 测定管 | |
样品（μl） | 100 | 100 |
试剂二（μl） | 900 | |
试剂三（μl） | 900 | |
充分混匀，37℃反应 10min，于 1mL 玻璃比色皿，蒸馏水调零， 测定 412nm 处吸光值，记为A 对照管和A 测定管，△A=A 测定管- A 对照管 | ||
计算公式：
1. 按照蛋白浓度计算
酶活性定义：每毫克蛋白每分钟水解HEPC 产生 1nmol 游离巯基所需的酶量为一个酶活力单位。
PLA2 活性（nmol/min/mg prot）= △A÷（e×d）×V 反总÷（V 样×Cpr）÷T
= 73.53×△A÷Cpr
2. 按照样本质量计算
酶活性定义：每克组织每分钟水解HEPC 产生 1nmol 游离巯基所需的酶量为一个酶活力单位。
PLA2 活性（nmol/min/g 鲜重）= △A÷（e×d）×V 反总÷（W×V 样÷V 样总）÷T
= 73.53×△A÷W
3. 细胞数量计算
酶活性定义：每 104 个细胞每分钟水解HEPC 产生 1nmol 游离巯基所需的酶量为一个酶活力单位。
PLA2 活性（nmol/min/104 cell）= △A÷（e×d）×V 反总÷（V 样×细胞数量÷V 样总）÷T
= 73.53×△A÷细胞数量
4 按照液体体积计算
酶活性定义：每毫升血清每分钟水解HEPC 产生 1nmol 游离巯基所需的酶量为一个酶活力单位。
PLA2 活性（nmol/min/mL）= △A÷（e×d）×V 反总÷V 样÷T
= 73.53×△A
e：TNB 消光系数，13600L/mol/cm；d：比色皿光径，1cm；V 反总：反应总体积，1mL；V 样：反应体系中加入样本体积，0.1mL；W：样本质量，g；V 样总：加入提取液体积，1mL；
T：反应时间，10min
电话
微信扫一扫
