酰基转移酶（alcohol acyl transferase，AAT）活性测定试剂盒说明书

分光光度法

正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定测定意义：

AAT 是一个多功能蛋白大家族，主要负责催化生物体内各种酰基化和去酰基化反应，在基因表达、代谢和信号传导中具有重要作用。

测定原理：

AAT 催化乙酰CoA 转移乙酰基到丁醇，释放的 CoA 还原DTNB 生成TNB；TNB 在 412nm 有吸收峰，测定 412 nm 吸光度增加速率可计算 AAT 活性。

酰基转移酶活性测定试剂盒   脂肪酸系列

组成：

自备仪器和用品：

研钵、冰、台式离心机、可见分光光度计、1ml 玻璃比色皿、恒温水浴锅、无水乙醇。

具体产品的参数以收到产品说明书的参数为准

粗酶液提取：

1. 组织：按照组织质量（g）：提取液体积(ml)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1ml 提取液）进行冰浴匀浆。8000g，4℃离心 10min，取上清置冰上待测。

2. 细菌、真菌：按照细胞数量（10⁴ 个）：提取液体积（ml）为 500~1000：1 的比例（建议 500 万细胞加入 1ml 提取液），冰浴超声波破碎细胞（功率 300w，超声 3 秒，间隔 7 秒，总时间 3min）；然后 8000g， 4℃，离心 10min，取上清置于冰上待测。

3. 液体：直接检测。

FA005-25T/24S-AAT 测定操作：

1、分光光度计预热 30min，调节波长到 412 nm，蒸馏水调零。

2、工作液的配制：临用前在试剂二瓶中加入 22.5mL 试剂一，充分混匀待用。用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。

3、试剂三的配制：临用前加无水乙醇 1.25mL 充分溶解待用，用不完的试剂 4℃保存。

4、 空白管：在Ep 管或 96 孔板中加入 50μl 提取液和 900μL 工作液，充分混匀，35℃反应 15min，加入

50μL 试剂三，充分混匀，25℃静置 10min，测定 412nm 处吸光值，记为 A 空白管。

5、 测定管：在 Ep 管或 96 孔板中加入 50μl 样本和 900μL 工作液，充分混匀，35℃反应 15min，加入 50μL

试剂三，充分混匀，25℃静置 10min，测定 412nm 处吸光值，记为A 测定管。△A=A 测定管- A 空白管，空白管只要做一管。

FA005-50T/48S-AAT 测定操作：

1、分光光度计预热 30min，调节波长到 412 nm，蒸馏水调零。

2、工作液的配制：临用前在试剂二瓶中加入 45ml 试剂一，充分混匀待用。用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。

3、试剂三的配制：临用前加无水乙醇 2.5ml 充分溶解待用，用不完的试剂 4℃保存。

4、 空白管：在 Ep 管或 96 孔板中加入 50μl 提取液和 900μl 工作液，充分混匀，35℃反应 15min，加入 50μl

试剂三，充分混匀，25℃静置 10min，测定 412nm 处吸光值，记为A 空白管。

5、 测定管：在Ep 管或 96 孔板中加入 50μl 样本和 900μl 工作液，充分混匀，35℃反应 15min，加入 50μl

试剂三，充分混匀，25℃静置 10min，测定 412nm 处吸光值，记为A 测定管。△A=A 测定管- A 空白管，空白管只要做一管。

AAT 活性计算公式：

（1） 按照蛋白浓度计算

活性单位定义：每毫克蛋白每分钟催化产生 1nmol TNB 定义为一个酶活单位。

AAT (nmol/min /mg prot) = △A ÷（e×d）×V 反总÷（V 样×Cpr）÷T = 98.04×△A÷Cpr

（2） 按照样本质量计算

活性单位定义：每克组织每分钟催化产生 1nmol TNB 定义为一个酶活单位。

AAT (nmol/min /g 鲜重) = △A ÷（e×d）×V 反总÷(W×V 样÷V 样总) ÷T = 98.04×△A÷W

（3） 按细胞数量计算

活性单位定义：每 10⁴ 个细胞每分钟催化产生 1nmol TNB 定义为一个酶活单位。

AAT (nmol/min /10⁴cell) = △A ÷（e×d）×V 反总÷(细胞数量×V 样÷V 样总) ÷T

= 98.04×△A÷ 细胞数量

（4） 按液体体积计算

活性单位定义：每毫升样品每分钟催化产生 1nmol TNB 定义为一个酶活单位。

AAT (nmol/min /ml) = △A ÷（e×d）×V 反总÷V 样÷T =98.04×△A

e：TNB 消光系数，13600L/mol/cm；V 反总：反应总体积，1ml；V 样：加入反应体系中上清液体积，0.05ml；

V 样总：加入提取液体积，1ml；Cpr：蛋白含量，mg/ml；W：样本质量，g；T：反应时间，15 min。

酰基转移酶活性测定试剂盒   脂肪酸系列