脂肪酸合成酶（fatty acid synthase，FAS）活性试剂盒说明书

分光光度法

正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定测定意义：

FAS 是脂肪酸合成关键酶，催化乙酰fu酶A 和丙二酰fu酶A 而生成长链脂肪酸。FAS 普遍表达于各种组织细胞中，在哺乳动物肝、肾、脑、肺和乳腺以及脂肪组织中表达丰富。

测定原理：

FAS 催化乙酰CoA、丙二酰 CoA 和NADPH 生成长链脂肪酸和NADP⁺；NADPH 在 340nm 有吸收峰，而NADP⁺没有；通过测定 340nm 光吸收下降速率，计算 FAS 活性。

脂肪酸合成酶活性试剂盒-常备现货

组成：

BR6009-10T/9S:

试剂一：液体 10ml×1 瓶，－20℃保存。用前取出置于 4℃充分解冻后混匀。

试剂二：粉剂×1 瓶，4℃保存。临用前加入 275 μl 试剂四，充分溶解，用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。

试剂三：粉剂×1 瓶，4℃保存。临用前加入 275 μl 试剂四，充分溶解，用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。

试剂五：粉剂×1 瓶，4℃保存。临用前加入 525 μl 试剂四，充分溶解，用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。

BR6009-25T/24S:

试剂一：液体 25ml×1 瓶，－20℃保存。用前 1 d 取出置于 4℃充分解冻后混匀。

试剂二：粉剂×1 瓶，4℃保存。临用前加入 550 μl 试剂四，充分溶解，用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。

试剂三：粉剂×1 瓶，4℃保存。临用前加入 550 μl 试剂四，充分溶解，用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。

试剂五：粉剂×1 瓶，4℃保存。临用前加入 1050 μl 试剂四，充分溶解，用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。

BR6009-50T/48S:

试剂一：液体 50ml×1 瓶，－20℃保存。用前 1 d 取出置于 4℃充分解冻后混匀。

试剂二：粉剂×1 瓶。临用前加入 1100 μl 试剂四，充分溶解，用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。

试剂三：粉剂×1 瓶，4℃保存。临用前加入 1100 μl 试剂四，充分溶解，用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。

试剂五：粉剂×1 瓶，4℃保存。临用前加入 2100μl 试剂四，充分溶解，用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。

具体产品的参数以收到产品说明书的参数为准

自备仪器和用品：

研钵、冰、台式离心机、紫外分光光度计、1ml 石英比色皿、可调式移液枪和蒸馏水。

粗酶液提取：

1. 组织：按照组织质量（g）：试剂一体积(ml)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1ml 试剂一）进行冰浴匀浆。12000g，4℃离心 40min，取上清置冰上待测。

2. 细菌、真菌：按照细胞数量（10⁴ 个）：试剂一体积（ml）为 500~1000：1 的比例（建议 500 万细胞加入 1ml 试剂一），冰浴超声波破碎细胞（功率 300w，超声 3 秒，间隔 7 秒，总时间 3min）；然后 12000g， 4℃，离心 40min，取上清置于冰上待测。

3. 血清等液体：直接测定。

FAS 测定操作：

1. 分光光度计预热 30min，调节波长到 340 nm，蒸馏水调零。

2. 试剂四置于 40℃水浴中预热 30 min。

3. 测定管：在 1ml 石英比色皿中依次加入 100μl 上清液、20μl 试剂二、20μl 试剂三、820μl 试剂四和 40μl试剂五，迅速混匀后于 340nm 处测定吸光值，记录第 30s 和 90s 时吸光值，分别记录为 A1 和A2。△A 测=A1-A2。

FAS 活性计算公式：

（1） 按照蛋白浓度计算

活性单位定义：37℃中每毫克蛋白每分钟氧化 1nmol NADPH 为 1 个酶活单位。

FAS(nmol/min/mg prot) =(△A÷ε÷d×V 反总×10⁹) ÷(Cpr×V 样)÷T

=1608×△A÷Cpr

（2） 按照样本质量计算

活性单位定义：37℃中每克组织每分钟氧化 1nmol NADPH 为 1 个酶活单位。

FAS(nmol/min/g 鲜重) = (△A÷ε÷d×V 反总×10⁹) ÷(W×V 样÷V 样总)÷T

=1608×△A ÷W

（3） 按细胞数量计算

活性单位定义：37℃中每 10⁴ 个细胞每分钟氧化 1nmol NADPH 为 1 个酶活单位。

FAS(nmol /min/10⁴cell) = (△A÷ε÷d×V 反总×10⁹) ÷(细胞数量×V 样÷V 样总)÷T

=1608×△A ÷细胞数量

（4） 按液体体积计算

活性单位定义：37℃中每毫升样本每分钟氧化 1nmol NADPH 为 1 个酶活单位。

FAS(nmol /min/ml) =(△A÷ε÷d×V 反总×10⁹) ÷V 样÷T

=1608×△A

ε：NADPH 摩尔消光系数，6.22×10³/mol/cm；d：比色皿光径，1 cm；V 反总：反应体系总体积，1000μl=0.001 L；Cpr：上清液蛋白质浓度，mg/ml；W：样本质量，g；V 样：加入反应体系中上清液体积，100μl=0.1 ml； T：反应时间，1min。

脂肪酸合成酶活性试剂盒-常备现货