脂肪酶（Lipase，LPS）活性试剂盒说明书

分光光度法 50 管/48 样

正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定测定意义：

LPS 又称甘油酯水解酶，催化甘油三酯水解生成脂肪酸和甘油（或者甘油二酯和单酯）。LPS 广泛的存在于各种生物中。血清中 LPS 的异常增高常见于胰腺炎和胰腺癌。

测定原理：

LPS 催化油酯水解成脂肪酸，利用铜皂法测定脂肪酸生成速率，即可计算 LPS 活性。

脂肪酶活性试剂盒 常备现货

组成：

试剂二：液体 14ml×1 瓶，4℃保存。每次使用前用震荡混匀器剧烈震荡 20min。

标准品：液体 10μl×1 瓶，10 µmol/ml 的标准溶液，4℃保存。临用前加入 3.168 ml 甲苯，充分溶解。

具体产品的参数以收到产品说明书的参数为准

自备仪器和用品：

研钵、台式离心机、震荡混匀器、可见分光光度计、1ml 玻璃比色皿、可调式移液枪、甲苯 100ml、冰和蒸馏水。

粗酶液提取：

1. 组织：按照组织质量（g）：试剂一体积(ml)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1ml 试剂一）进行冰浴匀浆。12000g，4℃离心 10min，取上清置冰上待测。

2. 细菌、真菌：按照细胞数量（10⁴ 个）：试剂一体积（ml）为 500~1000：1 的比例（建议 500 万细胞加入 1ml 试剂一），冰浴超声波破碎细胞（功率 300w，超声 3 秒，间隔 7 秒，总时间 3min）；然后 12000g， 4℃，离心 10min，取上清置于冰上待测。

3. 血清等液体: 直接检测。

LPS 测定操作：

1. 分光光度计预热 30 min 以上，调节波长到 710 nm，蒸馏水调零。

2. 试剂一和试剂二置于 37℃水浴预热 30min 以上。

2.  在 5ml EP 管中依次加入下列试剂

37℃振荡反应 10 min

37℃振荡反应 10 min 后，8000g，25℃，离心 10min，取上清液

37℃振荡反应 5 min 后，静置 5min，取 800μl 上层液加入 1 ml 玻璃比色皿，于 710nm 处测定吸光值。

注意：空白管和标准管只需测定一次。

LPS 活性计算公式：

1. 组织、细菌或细胞LPS 活性

（1） 按照蛋白浓度计算

活性单位定义：37℃中每毫克蛋白每分钟水解橄榄油生成 1μmol 脂肪酸为一个酶活单位。

LPS (μmol/min/mg prot) = [C 标准品×(A 测定管-A 空白管)÷（A 标准管- A 空白管）]×V 反总÷（Cpr×V 样）

÷T

=16×[(A 测定管－A 空白管)÷（A 标准管- A 空白管）]÷Cpr

（2） 按照样本质量计算

活性单位定义：37℃中每克组织每分钟水解橄榄油生成 1μmol 脂肪酸为一个酶活单位。

LPS (μmol/min/g 鲜重) = [C 标准品×(A 测定管-A 空白管)÷（A 标准管- A 空白管）]×V 反总÷（W×V 样÷V样总）÷T

=16×[(A 测定管－A 空白管)÷（A 标准管- A 空白管）]÷W

（3） 按照细菌或者细胞数量计算

活性单位定义：37℃中每 10⁴ 个细胞每分钟水解橄榄油生成 1μmol 脂肪酸为一个酶活单位。

LPS (μmol /min/10⁴cell) = [C 标准品×(A 测定管-A 空白管)÷（A 标准管- A 空白管）]×V 反总÷（细胞数量×V样÷V 样总）÷T

=16×[(A 测定管－A 空白管)÷（A 标准管- A 空白管）]÷细胞数量

2. 血清等液体LPS 活性

活性单位定义：37℃中每毫升血清每分钟水解橄榄油生成 1μmol 脂肪酸为一个酶活单位。

LPS (μmol /min/ml) = [C 标准品×(A 测定管－A 空白管)÷（A 标准管- A 空白管）]×V 反总÷V 样÷T

=16×[(A 测定管－A 空白管)÷（A 标准管- A 空白管）]

C 标准品：10 µmol/ml；V 反总：反应总体积，2ml；V 样：反应中加入样本体积，0.125ml；V 样总：加入提取液体积，1ml；Cpr：上清液蛋白质浓度，mg/ml，需要另外测定，建议使用本公司BCA 蛋白质含量测定试剂盒；W：样本质量，g；T：催化反应时间，10 min。

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