碱性磷酸酶（AKP/ALP）活性测定试剂盒说明书

微量法 100T/48S

正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定测定意义：

AKP/ALP 是一种含锌的糖蛋白酶，在碱性环境中可水解各种天然及人工合成的磷脂单酯化合物。

AKP/ALP 广泛分布于人体各脏器中，以肝脏为主。

测定原理：

在碱性环境中，AKP/ALP 催化磷酸苯二钠生成游离酚；酚与 4-氨基安替bi林和铁氰hua钾反应红色亚醌衍生物，在 510nm 有特征光吸收；通过测定 510 nm 吸光度增加速率，来计算AKP 活性。

碱性磷酸酶活性测定试剂盒 酯酶系列

组成：

试剂四：液体×1 瓶，4℃避光保存，未变成蓝绿色之前均可使用。标准品：液体×1 支（EP 管中），2 μmol/ml 酚标准液，4℃保存。

自备仪器和用品：

可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96 孔板、台式离心机、水浴锅、可调式移液器和蒸馏水。

具体产品的参数以收到产品说明书的参数为准

粗酶液提取：

1. 组织：按照组织质量（g）：试剂一体积(ml)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1ml 试剂一）进行冰浴匀浆，4℃、8000g 离心 10min，取上清液待测。

2. 细菌或细胞：按照细菌或细胞数量（104 个）：试剂一体积（ml）为 500~1000：1 的比例（建议 500 万细胞加入 1ml 试剂一），冰浴超声波破碎细胞（功率 300w，超声 3 秒，间隔 7 秒，总时间 3min）；然后 8000g，4℃，离心 10min，取上清置于冰上待测。

3. 血液可直接测定，或者适当稀释后测定。

测定步骤：

1. 分光光度计/酶标仪预热 30min，调节波长到 510 nm，蒸馏水调零。

2. 试剂三置于 37℃水浴中预热 30 min。

3. 空白管：取EP 管，加入 4μl 蒸馏水，40μl 试剂二，40μl 试剂三，混匀后置于 37℃水浴中保温 15min；加入试剂四 120μl，混匀后于 510nm 测定吸光度，记为A 空白管。

4. 标准管：取EP 管，加入 4μl 标准品，40μl 试剂二，40μl 试剂三，混匀后置于 37℃水浴中保温 15min；

加入试剂四 120μl，混匀后于 510nm 测定吸光度，记为A 标准管。

5. 对照管：取EP 管，加入 4μl 上清液，40μl 蒸馏水，40μl 试剂三，混匀后置于 37℃水浴中保温 15min；加入试剂四 120μl，混匀后于 510nm 测定吸光度，记为A 测定管。

6. 测定管：取EP 管，加入 4μl 上清液，40μl 试剂二，40μl 试剂三，混匀后置于 37℃水浴中保温 15min；

加入试剂四 120μl，混匀后于 510nm 测定吸光度，记为A 测定管。其中标准管和空白管只需做一管，测定管和对照管每个样均需做。

注意：空白管和标准管只需测定一次。

AKP/ALP 活性计算：

1. 血液中AKP/ALP 活力计算

活性单位定义：37℃中每毫升血液每分钟催化产生 1μmol 酚定义为 1 个酶活单位。

AKP/ALP 活力(μmol/min /ml)= [C 标准品×(A 测定管-A 对照管)÷(A 标准管-A 空白管)×V 反总] ÷V 样

÷T=6.8×(A 测定管-A 对照管)÷(A 标准管-A 空白管)

2. 组织、细菌或细胞中AKP/ALP 活性计算

（1） 按照蛋白浓度计算

活性单位定义：37℃中每毫克蛋白每分钟催化产生 1 μ mol 酚定义为 1 个酶活单位。 AKP/ALP(μmol/min/mg prot)=[C 标准品×(A 测定管-A 对照管)÷(A 标准管-A 空白管)×V 反总]÷(Cpr×V样)÷T=6.8×(A 测定管-A 对照管)÷(A 标准管-A 空白管) ÷Cpr

（2） 按照样本质量计算

活性单位定义：37℃中每克组织每分钟催化产生 1 μ mol 酚定义为 1 个酶活单位。

AKP/ALP(μmol/min/g 鲜重)=[C 标准品×(A 测定管-A 对照管)÷(A 标准管-A 空白管)×V 反总]÷(W×V 样÷V样总)÷T=6.8×(A 测定管-A 对照管)÷(A 标准管-A 空白管) ÷W

（3） 按照细菌或细胞数量计算

活性单位定义：37℃中每 10⁴ 个细菌或细胞每分钟催化产生 1 μ mol 酚定义为 1 个酶活单位。AKP/ALP (μmol/min/10⁴ cell)= [C 标准品×(A 测定管-A 对照管)÷(A 标准管-A 空白管)×V 反总]÷(细胞数量×V 样÷V 样总)÷T= 6.8×(A 测定管-A 对照管)÷(A 标准管-A 空白管) ÷细胞数量

C 标准品：2μmol/ml；V 反总：反应体系总体积（ml），205μl=0.205ml； Cpr：粗酶液蛋白质浓度（mg/ml），需要另外测定，建议使用本公司生产的 BCA 蛋白质含量测定试剂盒；W ：样品质量；V 样：加入反应体系中上清液体积（ml），0.004ml；V 样总：提取液体积，1 ml；T：反应时间（min），15 min。

注意事项：

1. 试剂二、试剂三和试剂四均需避光保存。

2. 试剂四变蓝绿色后不能再使用。

3. 加入试剂四后必须立即混匀，否则显色不wan全。

碱性磷酸酶活性测定试剂盒 酯酶系列