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H2S 含量测定试剂盒说明书
微量法 100T/96S
H2S 是一种新型气态信号分子，存在于脑内的神经递质，生理浓度的H2S 对神经系统海马的长时程增强功能具有重要的调节作用，并对自发性高血压、出血性休克及肝硬化等疾病的过程发挥着重要的病理生理效应。
H2S 与醋酸锌、N, N-二甲基对苯二胺和硫酸铁铵等反应生成亚甲基蓝，亚甲基蓝在 665nm 处有最大吸收峰，通过测定其吸光值可计算H2S 含量。
产品名称 | DC6002-100T/96S | Storage |
提取液：液体 | 100ml | 4℃ |
试剂一：液体 | 25ml | 4℃ |
试剂二：液体 | 16ml | 4℃ |
试剂三：液体 | 8ml | 4℃避光 |
试剂四：液体 | 8ml | 4℃ |
试剂五：液体 | 1.5ml | 4℃避光 |
说明书 | 一份 | |
自备仪器和用品：
天平、低温离心机、酶标仪、96 孔板、蒸馏水。
具体产品的参数以收到产品说明书的参数为准
1. 组织：按照组织质量（g）：提取液体积(ml)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1ml 提取液）进行冰浴匀浆，然后 10000g，4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
2. 细菌、真菌：按照细胞数量（104 个）：提取液体积（ml）为 500~1000：1 的比例（建议 500 万细胞加入 1ml 提取液），冰浴超声波破碎细胞（功率 300w，超声 3 秒，间隔 7 秒，总时间 3min）；然后 10000g， 4℃，离心 10min，取上清置于冰上待测。
3. 血清（浆）：直接测定。
1、酶标仪预热 30min，调节波长至 665nm。
2、操作表
空白管 | 测定管 | |
样品（μl） | 150 | |
H2O（μl） | 150 | |
试剂一（μl） | 150 | 150 |
充分震荡混匀 | ||
试剂二（μl） | 150 | 150 |
10000g，4℃，离心 10min，去上清，留沉淀 | ||
H2O（μl） | 150 | 150 |
10000g，4℃，离心 10min，去上清，留沉淀 | ||
试剂一（μl） | 75 | 75 |
试剂三（μl） | 75 | 75 |
充分震荡混匀 | ||
试剂四（μl） | 75 | 75 |
10000rpm，4℃，离心 10min，吸取 200μl 上清于 96 孔板中 | ||
试剂五（μl） | 10 | 10 |
混匀，25℃静置 5min，测定 665nm 吸光值，记为A 测定和A 空白，ΔA=A 测定-A 空白。 | ||
用 96 孔板测定的计算公式如下
标准曲线回归方程为：y = 0.0022x，R2 = 0.9988
（1） 组织样品
a.按照蛋白浓度计算
H2S（nmol/mg prot）= b.按照样本重量计算 H2S（nmol/g 鲜重）=
(3) 细胞
H2S（nmol/104 cell）=
ΔA ×V 反总÷(V 样×Cpr)=681.8×ΔA÷Cpr
0.0022
ΔA ×V 反总÷(V 样÷V 样总×W)= 681.8×ΔA÷W
ΔA ×V 反总÷（V 样÷V 样总×细胞数量(万个)）=681.8×ΔA÷细胞数量（万个）
（2） 液体样品H2S（nmol/ml）=
ΔA ×V 反总÷V 样= 681.8×ΔA
0.0022
V 反总：反应总体积，0.225ml；V 样：反应中样品体积，0.15ml；V 样总：加入提取液体积，1ml；W：样品质量，g；Cpr：蛋白浓度，mg/ml
注意事项:zui低检出限为 1nmol/ml。
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