羧酸酯酶（CarE）活性测定试剂盒说明书

微量法 100T/96S

正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定测定意义：

哺乳动物CarE，也称脂族酯酶（aliesterase），广泛分布于组织和器官，属于丝an酸水解酶家族。CarE催化含酯键、酰胺键和硫酯键的内源性与外源性物质水解，但不能催化水解乙酰dan碱及其类似物。CarE 参与脂质运输和代谢，并且与多种药物、环境毒物以及致癌物的解毒和代谢有关，有机磷农药可结合并且抑制CarE 活性。

测定原理：

CarE 能催化乙酸-1-萘酯生成萘酯，固篮显色；在 450 nm 光吸收增加速率，计算CarE 活性。

羧酸酯酶（CarE）活性测定试剂盒

组成：

试剂三：粉剂×2 支， 4℃保存，临用前取 1 支试剂三，加 0.6ml 无水乙醇充分溶解；试剂四：粉剂×2 支，-20℃保存，临用前取 1 支试剂四，加少量试剂二溶解；

工作液配制：临用前配制，向 1 瓶试剂二中，加入溶解后的试剂三和试剂四各 1 支，充分溶解，过滤，4℃避光保存，可用 1 周。

具体产品的参数以收到产品说明书的参数为准

自备仪器和用品：

可见分光光度计、台式离心机、可调式移液器、1 ml 玻璃比色皿、研钵、冰和蒸馏水。

粗酶液提取：

细菌、细胞样品制备

收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照每 200 万细菌或细胞加入 400μl 试剂一，超声波破碎细菌或细胞（功率 20％，超声 3s，间隔 10s，重复 30 次）；12000g 4℃离心 30min，取上清液待测。

2、组织：按照组织质量（g）：试剂一体积(ml)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1ml 试剂一）进行冰浴匀浆；12000g 4℃离心 30min，取上清液待测。

3、液体：直接测定

测定操作：

1. 分光光度计/酶标仪预热 30min，调节波长到 450 nm，蒸馏水调零。

2. 试剂二置于 37℃水浴中预热 30 min。

3. 空白管：取微量玻璃比色皿/96 孔板，依次加入 5μl 蒸馏水和 200μl 试剂二，迅速混匀，于 450nm 处测定 3min 内吸光值变化，第 10s 吸光值记为A1，第 190s 吸光值记为A2。△A 空白管=A2-A1

4. 测定管：取微量玻璃比色皿/96 孔板，依次加入 5μl 上清液和 200μl 试剂二，迅速混匀，于 450nm 处测

定 3min 内吸光值变化，第 10s 吸光值记为A3，第 190s 吸光值记为A4。△A 测定管=A4-A3

注意：空白管只需测定一次。

CarE 活性计算公式：

a. 使用微量石英比色皿测定的计算公式如下

1、组织中CarE 活性

（1） 按蛋白浓度计算

CarE 活性单位定义：每mg 组织蛋白在 37℃反应体系中每分钟催化吸光值增加 1 定义为 1 个酶活单位。

CarE 酶活(U/mg prot)= (△A 测定管-△A 空白管) ×V 反总÷(Cpr×V 样)÷T

= 13.67×(△A 测定管-△A 空白管)÷Cpr

（2） 按样本鲜重计算

CarE 活性单位定义：每g 组织在 37℃反应体系中每分钟催化吸光值增加 1 定义为 1 个酶活单位。

CarE 酶活(U/g 鲜重)= (△A 测定管-△A 空白管) ×V 反总×（V 样总÷V 样）÷W÷T

=13.67×(△A 测定管-△A 空白管)÷W 2、细菌或细胞中CarE 活性

CarE 活性单位定义：每 1 万个细菌或细胞在 37℃反应体系中每分钟催化吸光值增加 1 定义为一个CarE 活

性单位。

CarE 酶活(U/10⁴ cell)= (△A 测定管-△A 空白管) ×V 反总×（V 样总÷V 样）÷细胞密度（10⁴ cell/ml）

÷T=13.67×(△A 测定管-△A 空白管)÷细胞密度（10⁴ cell/ml） 3、液体中CarE 活性

CarE 活性单位定义：每毫升样品在 37℃反应体系中每分钟催化吸光值增加 1 定义为 1 个酶活单位。

CarE 酶活(U/ml )= (△A 测定管-△A 空白管) ×V 反总÷V 样÷T

=13.67×(△A 测定管-△A 空白管)

V 反总：反应体系总体积，205μl=2.05×10^-4L；V 样总：上清液总体积，1 ml；V 样：加入上清液体积(ml)，

0.005 ml；Cpr：蛋白质浓度，mg/ml；W：样品质量（g）；T：反应时间（min），3min。

b. 使用 96 孔板测定的计算公式如下

1、组织中CarE 活性

（3） 按蛋白浓度计算

CarE 活性单位定义：每mg 组织蛋白在 37℃反应体系中每分钟催化吸光值增加 1 定义为 1 个酶活单位。

CarE 酶活(U/mg prot)= (△A 测定管-△A 空白管) ×V 反总÷(Cpr×V 样)÷T

= 13.67×(△A 测定管-△A 空白管)÷Cpr

（4） 按样本鲜重计算

CarE 活性单位定义：每g 组织在 37℃反应体系中每分钟催化吸光值增加 1 定义为 1 个酶活单位。

CarE 酶活(U/g 鲜重)= (△A 测定管-△A 空白管) ×V 反总×（V 样总÷V 样）÷W÷T

=13.67×(△A 测定管-△A 空白管)÷W 2、细菌或细胞中CarE 活性

CarE 活性单位定义：每 1 万个细菌或细胞在 37℃反应体系中每分钟催化吸光值增加 1 定义为一个CarE 活

性单位。

CarE 酶活(U/10⁴ cell)= (△A 测定管-△A 空白管) ×V 反总×（V 样总÷V 样）÷细胞密度（10⁴ cell/ml）

÷T=13.67×(△A 测定管-△A 空白管)÷细胞密度（10⁴ cell/ml）

3. 液体中CarE 活性

CarE 活性单位定义：每毫升样品在 37℃反应体系中每分钟催化吸光值增加 1 定义为 1 个酶活单位。

CarE 酶活(U/ml )= (△A 测定管-△A 空白管) ×V 反总÷V 样÷T

=13.67×(△A 测定管-△A 空白管)

V 反总：反应体系总体积，205μl=2.05×10^-4L；V 样总：上清液总体积，1 ml；V 样：加入上清液体积(ml)，

0.005 ml；Cpr：蛋白质浓度，mg/ml；W：样品质量（g）；T：反应时间（min），3min。

羧酸酯酶（CarE）活性测定试剂盒