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碱性木聚糖酶测定试剂盒 糖代谢系列
简要描述:

木聚糖酶(EC 3.2.1.8)主要由微生物产生,能催化水解木聚糖,也被称为戊聚糖酶或半纤维素酶,可分解酿造或饲料工业中的原料细胞壁以及β-葡聚糖,降低酿造中物料的粘度,促进有效物质的释放,以及降低饲料中的非淀粉多糖,促进营养物质的吸收利用
碱性木聚糖酶测定试剂盒 糖代谢系列

  • 产品型号:BI6046
  • 厂商性质:经销商
  • 更新时间:2025-04-11
  • 访  问  量:111
详情介绍


碱性木糖酶(Basic XylanaseBAX测定试剂盒说明书

分光光度法 50 /24 


正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定测定意义:

木聚糖酶(EC 3.2.1.8)主要由微生物产生,能催化水解木聚糖,也被称为戊聚糖酶或半纤维素酶,可分解酿造或饲料工业中的原料细胞壁以及β-葡聚糖,降低酿造中物料的粘度,促进有效物质的释放,以及降低饲料中的非淀粉多糖促进营养物质的吸收利用,因而广泛的应用于酿造和饲料工业中,BAX 一般分离自最适生长pH 9 -11 的微生物。

测定原理:

BAX 在碱性环境中催化木聚糖降解成还原性寡糖和单糖,在沸水浴条件下进一步与 3,5-二硝基水杨酸发生显色反应,在 540nm 处有特征吸收峰,反应液颜色的深浅与酶解产生的还原糖量成正比,通过测定反应液在 540nm 吸光值增加速率,可计算BAX 活力。


碱性木聚糖酶测定试剂盒 糖代谢系列


组成:

产品名称

BI6046-50T/24S

Storage

缓冲液:液体

65ml

4℃

试剂一:液体

10ml

4℃避光

试剂二:液体

15ml

4℃避光

说明书

一份

试剂一:液体 10ml×1 瓶,4℃避光保存。(若出现白色絮状或颗粒状沉淀,可 60℃加热溶解后使用


具体产品的参数以收到产品说明书的参数为准


自备仪器和用品:

天平、低温离心机、恒温水浴锅,可见分光光度计、1 ml 玻璃比色皿和蒸馏水。

粗酶提取:

1. 发酵液:发酵液于 8000g,4℃,离心 15min,取上清,作为待测样品。

2. 酶干粉:称约 0.1mg,加 1ml 缓冲液溶解待测。

3. 组织样本:按照组织质量(g):提取液体积(ml) 1:5~10 的比例(建议称取约 0.1g 组织,加入 1ml缓冲液)进行冰浴匀浆,然后 8000g,4℃,离心 10min,取上清待测。

测定操作表:



对照管

测定管



样品(μl)

200

200


缓冲液(μl)

300

300

试剂一(μl)


200

试剂二(μl)

300


混匀,盖紧瓶盖,50℃水浴,反应 30min,立即沸水浴 10min 灭活。(注意不要让盖子爆

开,以免进水,改变了反应体系)

试剂一(μl)

200


试剂二(μl)


300

混匀,沸水浴显色 5min(注意不要让盖子爆开,以免进水改变了反应体系),1ml 玻璃比

色皿,540nm 处测定吸光值A,计算ΔA=A 测定管-A 对照管。每个测定管设一个对照管。

 

BAX 计算公式:

标准曲线:y = 2.8432x - 0.0293,R2 = 0.9985

1. 按液体体积活力计算:

酶活定义:50℃,pH9.0 条件下,每毫升液体样本每分钟分解木聚糖产生 1nmol 还原糖所需的酶量为一个碱性木聚糖酶的活力单位。

BAX 活力(nmol/min/ml)= (ΔA+0.0293)÷2.8432÷150÷T×稀释倍数×106

= 391× (ΔA+0.0293)

2. 按蛋白浓度计算:

酶活定义:50℃,pH9.0 条件下,每毫克蛋白每分钟分解木聚糖产生 1nmol 还原糖所需的酶量为一个碱性木聚糖酶的活力单位。

BAX 活力(nmol/min/mg prot)= (ΔA +0.0293)÷2.8432÷150÷T×稀释倍数×106÷Cpr

= 391×(ΔA +0.0293 ) ÷Cpr

3. 按鲜重计算:

酶活定义:50℃,pH9.0 条件下,每克样本每分钟分解木聚糖产生 1nmol 还原糖所需的酶量为一个碱性木聚糖酶的活力单位。

BAX 活力(nmol/min/g 鲜重)= (ΔA +0.0293)÷2.8432÷150÷T×稀释倍数×106÷W

= 391×(ΔA +0.0293 ) ÷W

 

150:木糖的分子量;T:反应时间,30min;稀释倍数=V 反总÷V 样=1000µL÷200µL=5;

106:转化因子,即 1mg/ml=106ng/ml;Cpr:样本蛋白浓度,mg/ml;W:样本质量,g

注意事项:

1. 吸光度变化应该控制在 0.01~0.8 之间,否则加大样品量或稀释样品,注意计算公式中参与计算的稀释倍数要相应改变;也可以延长或者缩短反应时间。

2. 试剂盒 2-8℃保存,保质期 3 个月,建议尽快使用。

碱性木聚糖酶测定试剂盒 糖代谢系列


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