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天冬酰an合成酶(asparagine synthetase，AS) 活性测定试剂盒说明书
微量法 100 管/96 样
天an酰胺合成酶是广泛存在于生物体内的一类氨基转移酶，催化谷an酞胺的氨基向天冬氨酸转移。当植物处于氨毒时天an酞胺的形成是一种解毒反应。
AS 催化L-天an酰胺水解成 L-天冬an酸和氨，利用奈氏试剂检测氨增加的速率，即可计算其酶活性。
产品名称 | BG6010-100T/96S | Storage |
试剂一：液体 | 60 ml | 4℃ |
试剂二：液体 | 40ml | 4℃ |
试剂三：液体 | 60 ml | 常温 |
试剂四：液体 | 5 ml | 常温 |
试剂五：液体 | 3 ml | 常温 |
试剂六：液体 | 3 ml | 常温避光 |
说明书 | 一份 | |
具体产品的参数以收到产品说明书的参数为准
自备仪器和用品：
台式离心机、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96 孔板、可调式移液枪、研钵、冰和双蒸水。
1、细菌、细胞或组织样品的制备：
细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（104 个）：试剂一体积（ml）为 500~1000：1 的比例（建议 500 万细菌或细胞加入 1ml 试剂一），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率 20％或 200W，超声 3s，间隔 10s，重复 30 次）；8000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
组织：按照组织质量（g）：试剂一体积(ml)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1ml 试剂一），进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
2、血清（浆）样品：直接检测。
1、分光光度计或酶标仪预热 30min 以上，调节波长至 420nm，蒸馏水调零。
2、样品测定（在 EP 管中加入下列试剂）：
试剂名称（μl） | 测定管 | 对照管 |
样本 | 25 | |
蒸馏水 | 25 | |
试剂一 | 100 | 100 |
试剂二 | 400 | 400 |
混匀，37℃水浴 1 小时
试剂三 | 525 | 525 |
混匀，8000 g，25℃离心 10 min；取上清液，在EP 管或 96 孔板中加入下列试剂
上清液 | 130 | 130 |
试剂四 | 30 | 30 |
试剂五 | 20 | 20 |
试剂六 | 20 | 20 |
混匀，室温静置 15min，420nm 处读取测定管和对照管吸光值，计算ΔA=A 测定管-A 对照管。对照管只要做一管。
注意：试剂六如出现沉淀，静置后取上清使用。
a. 用微量石英比色皿测定的计算公式如下
标准条件下测定的回归方程为y = 0.662x -0.0434；x 为标准品浓度（μg/ml），y 为吸光值 A。 1、血清（浆）AS 活性
单位定义：每ml 血清（浆）每小时产生 1μg 氨定义为一个酶活力单位。
AS（μg/h/ml）＝(ΔA+0.0434) ÷0.662×V 反总÷V 样÷T=31.722×(ΔA+0.0434)
2、组织、细菌或细胞中 AS 活力的计算:
（1） 按样本蛋白浓度计算：
单位的定义：每mg 组织蛋白每小时产生 1μg 氨定义为一个酶活力单位。
AS 活力（μg/h/mg prot）＝(ΔA+0.0434) ÷0.662×V 反总÷(V 样×Cpr)÷T =31.722×(ΔA+0.0434) ÷Cpr
（2） 按样本鲜重计算：
单位的定义：每g 组织每小时产生 1μg 氨定义为一个酶活力单位。
AS 活力（μg/h/g 鲜重）＝(ΔA+0.0434) ÷0.662×V 反总÷(W× V 样÷V 样总)÷T =31.722×(ΔA +0.0434) ÷W
（3） 按细菌或细胞密度计算：
单位的定义：每 1 万个细菌或细胞每小时产生 1μg 氨定义为一个酶活力单位。
AS 活力（μg/h/104 cell）＝(ΔA+0.0434) ÷0.662×V 反总÷(500×V 样÷V 样总) ÷T=0.0634×(ΔA+0.0434)
T：反应时间，1h； V 反总：反应体系总体积：0.525ml；V 样：加入反应体系中样本体积，0.025ml；V样总：提取液体积，1ml；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/ml； W：样本质量， g；500：细菌或细胞总数， 500 万
标准条件下测定的回归方程为y = 0.3046x -0.0097；x 为标准品浓度（μg/ml），y 为吸光值A。 1、血清（浆）AS 活力的计算:
单位的定义：每ml 血清（浆）每小时产生 1μg 氨定义为一个酶活力单位。
AS 活力（μg/h/ml）＝(ΔA +0.0097) ÷0.3046×V 反总÷V 样÷T=68.94×(ΔA +0.0097)
2、组织、细菌或细胞中 AS 活力的计算:
（1） 按样本蛋白浓度计算：
单位的定义：每mg 组织蛋白每小时产生 1μg 氨定义为一个酶活力单位。
AS 活力（μg/h/mg prot）＝(ΔA +0.0097) ÷0.3046×V 反总÷(V 样×Cpr)÷T =68.94×(ΔA +0.0097) ÷Cpr
（2） 按样本鲜重计算：
单位的定义：每g 组织每小时产生 1μg 氨定义为一个酶活力单位。
AS 活力（μg/h/g 鲜重）＝(ΔA +0.0097) ÷0.3046×V 反总÷(W× V 样÷V 样总)÷T =68.94×(ΔA +0.0097）÷W
（3） 按细菌或细胞密度计算：
单位的定义：每 1 万个细菌或细胞每小时产生 1μg 氨定义为一个酶活力单位。
AS 活力（μg/h/104 cell）＝(ΔA+0.0097) ÷0.3046×V 反总÷(500×V 样÷V 样总) ÷T=0.1379×(ΔA +0.0097)
T：反应时间，1h； V 反总：反应体系总体积：0.525ml；V 样：加入反应体系中样本体积，0.025ml；V样总：提取液体积，1ml；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/ml； W：样本质量， g；500：细菌或细胞总数， 500 万。
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