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脲酶（Urease， UE）测定试剂盒说明书
微量法 100 管/48 样
UE 能够水解尿素，产生氨和碳酸。UE 活性与有机物质含量、全氮和速效氮含量呈正相关，反应了氮素状况。
利用靛酚蓝比色法测定脲酶水解尿素产生的 NH3-N。
产品名称 | BG6008-100T/48S | Storage |
提取液：液体 | 60ml | 4℃ |
试剂一：粉剂 | 1 瓶 | 4℃ |
试剂二：液体 | 22ml | 4℃ |
试剂三A 液：液体 | 1 支 | 4℃ |
试剂三 B 液：液体 | 1 瓶 | 4℃ |
试剂四：液体 | 2ml | 4℃ |
说明书 | 一份 | |
试剂一：粉剂×1 瓶，临用前加入 9ml 蒸馏水，充分溶解待用，4℃保存；用不完的试剂 4℃保存；
试剂三A 液：液体×1 支，4℃保存；试剂三B 液：液体×1 瓶，4℃保存；临用前将A 液倒入B 液中混合，待用；用不完的试剂 4℃保存一周；
具体产品的参数以收到产品说明书的参数为准
可见分光光度计/酶标仪、水浴锅、可调式移液器、微量石英比色皿/96 孔板、研钵、冰、甲苯（不允许快递）和蒸馏水。
1、细菌、细胞或组织样品的制备：
细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（104 个）：提取液体积（ml）为 500~1000：1 的比例（建议 500 万细菌或细胞加入 1ml 提取液），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率 20％或 200W，超声 3s，间隔 10s，重复 30 次）；8000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
组织：按照组织质量（g）：提取液体积(ml)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1ml 提取液），进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
2、血清（浆）样品：直接检测。
1、分光光度计或酶标仪预热 30min 以上，调节波长至 578nm，蒸馏水调零。
2、酶促反应
试剂名称 | 测定管 | 对照管 |
样本（μl） | 20 | 20 |
试剂一（μl） | 90 | |
蒸馏水（μl） | 90 | |
试剂二（μl） | 190 | 190 |
混匀，放入 37℃水浴 1h 后，10000g 25℃离心 10min，取上清液。 2、将上清液稀释 10 倍（取 0.1ml 上清液，加入 0.9ml 蒸馏水）。
3
测氨量（在微量石英比色皿或 96 孔板中加入下列试剂）
测定管 | 对照管 | |
稀释后的上清液（μl） | 80 | 80 |
试剂三（μl） | 15 | 15 |
试剂四（μl） | 15 | 15 |
充分混匀，室温放置 20min
蒸馏水（μl） | 90 | 90 |
混匀，于 578nm 处，蒸馏水调零，读吸光值A，计算ΔA=A 测定管-A 对照管。每个测定管设一个对照管。
a. 用微量石英比色皿测定的计算公式如下
标准条件下测定的回归方程为y = 0.0915x +0.0373；x 为标准品浓度（μg/ml），y 为吸光值A。 1、血清（浆）UE 活力的计算:
单位的定义：每ml 血清（浆）每分钟产生 1μg NH3-N 定义为一个酶活力单位。
UE 活力（μg/min/ml）＝(ΔA-0.0373) ÷0.0915×10×V 反总÷V 样÷T=27.32×(ΔA -0.0373)
单位的定义：每天每g 土样中产生 1μg NH3-N 定义为一个酶活力单位。
2、组织、细菌或细胞中 1μg NH3-N 活力的计算:
（1） 按样本蛋白浓度计算：
单位的定义：每mg 组织蛋白每分钟产生 1μg NH3-N 定义为一个酶活力单位。
UE 活力（μg/min/mg prot）＝(ΔA-0.0373) ÷0.0915×10×V 反总÷(V 样×Cpr)÷T =27.32×(ΔA -0.0373) ÷Cpr
（2） 按样本鲜重计算：
单位的定义：每g 组织每分钟产生 1μg NH3-N 定义为一个酶活力单位。
UE 活力（μg/min/ g 鲜重）＝(ΔA-0.0373) ÷0.0915×10×V 反总÷(W× V 样÷V 样总)÷T =27.32×(ΔA -0.0373) ÷W
（3） 按细菌或细胞密度计算：
单位的定义：每 1 万个细菌或细胞每分钟产生 1μg NH3-N 定义为一个酶活力单位。
UE 活力（μg/min/104 cell）＝(ΔA-0.0373) ÷0.0915×10×V 反总÷(500×V 样÷V 样总) ÷T=0.0546×ΔA
10：稀释倍数；T：反应时间，60min； V 反总：反应体系总体积：0.3ml；V 样：加入反应体系中样本体积，0.02ml；V 样总：提取液体积，1ml；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/ml； W：样本质量， g；500：细菌或细胞总数，500 万。
标准条件下测定的回归方程为y = 0.04575x +0.0373；x 为标准品浓度（μg/ml），y 为吸光值A。 1、血清（浆）UE 活力的计算:
单位的定义：每ml 血清（浆）每分钟产生 1μg NH3-N 定义为一个酶活力单位。
UE 活力（μg/min/ml）＝(ΔA-0.0373) ÷0.04575×10×V 反总÷V 样÷T=54.64×(ΔA -0.0373)
单位的定义：每天每 g 土样中产生 1μg NH3-N 定义为一个酶活力单位。
2、组织、细菌或细胞中 1μg NH3-N 活力的计算:
（1） 按样本蛋白浓度计算：
单位的定义：每mg 组织蛋白每分钟产生 1μg NH3-N 定义为一个酶活力单位。
UE 活力（μg/min/mg prot）＝(ΔA-0.0373) ÷0.04575×10×V 反总÷(V 样×Cpr)÷T =54.64×(ΔA -0.0373) ÷Cpr
（2） 按样本鲜重计算：
单位的定义：每g 组织每分钟产生 1μg NH3-N 定义为一个酶活力单位。
UE 活力（μg/min/g 鲜重）＝(ΔA-0.0373) ÷0.04575×10×V 反总÷(W× V 样÷V 样总)÷T =54.64×(ΔA -0.0373) ÷W
（3） 按细菌或细胞密度计算：
单位的定义：每 1 万个细菌或细胞每分钟产生 1μg NH3-N 定义为一个酶活力单位。
UE 活力（μg/min/104 cell）＝(ΔA-0.0373) ÷0.04575×10×V 反总÷(500×V 样÷V 样总) ÷T=0.1092×ΔA
10：稀释倍数；T：反应时间，60min； V 反总：反应体系总体积：0.3ml；V 样：加入反应体系中样本体积，0.02ml；V 样总：提取液体积，1ml；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/ml； W：样本质量， g；500：细菌或细胞总数，500 万。
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