谷an酰胺酶(glutaminase, GLS) 活性测定试剂盒说明书

微量法 100 管/96 样

正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定测定意义：

GLS（EC 3.5.1.1）是酰胺基水解酶，催化天冬酰an水解成谷an酸和氨，在氮素代谢中具有重要调控作用，尤其是调节游离氨含量和尿素代谢。

测定原理：

GLS 催化谷an酰胺水解成 L-谷an酸和氨，利用奈氏试剂检测氨增加的速率，即可计算其酶活性。

谷an酰胺酶活性测定试剂盒   氮代谢系列

组成：

具体产品的参数以收到产品说明书的参数为准

自备仪器和用品：

台式离心机、酶标仪、96 孔板、可调式移液枪、研钵、冰和双蒸水。

粗酶液提取：

1、细菌、细胞或组织样品的制备：

细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（10⁴ 个）：试剂一体积（ml）为 500~1000：1 的比例（建议 500 万细菌或细胞加入 1ml 试剂一），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率 20％或 200W，超声 3s，间隔 10s，重复 30 次）；8000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。

组织：按照组织质量（g）：试剂一体积(ml)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1ml 试剂一），进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。

2、血清（浆）样品：直接检测。

测定步骤：

1、酶标仪预热 30min 以上，调节波长至 420nm。

2、样品测定（在 EP 管中加入下列试剂）：

混匀，37℃水浴 1 小时

混匀，8000 g，25℃离心 10 min；取上清液，在 96 孔板中加入下列试剂

混匀，室温静置 15min，420nm 处读取测定管和对照管吸光值，计算ΔA=A 测定管-A 对照管。对照管只要做一管。

注意：

1、试剂六如出现沉淀，静置后取上清使用。

2、ΔA（A 测定管-A 对照管）若出现负值，可能是酶活性较低，可将反应时间 1h 延长到 2h，相应的在计算公式中除以 2。

酶活性计算：

标准条件下测定的回归方程为y = 1.9244x + 0.0057，R² = 0.9983；x 为标准品浓度（μmol/ml），y 为吸光值A。

1、血清（浆）GLS 活性

单位定义：每 ml 血清（浆）每 min 催化谷an酰胺生成 1nmol 氨定义为一个酶活力单位。GLS(nmol /min /ml)

＝ (ΔA-0.0057) ÷1.9244×V 反总÷V 样÷T×1000=363.7×(ΔA -0.0057)

2、组织、细菌或细胞 GLS 活性

（1） 按样本蛋白浓度计算：

单位定义：每mg 蛋白质每min 催化谷an酰胺生成 1nmol 氨定义为一个酶活力单位。

GLS(nmol /min /mg prot)＝ (ΔA-0.0057) ÷1.9244×V 反总÷(V 样×Cpr)÷T×1000=363.7×(ΔA -0.0057)÷Cpr。

（2） 按样本鲜重计算：

单位定义：每g 组织每min 催化谷an酰胺生成 1nmol 氨定义为一个酶活力单位。

GLS(nmol/min /g 鲜重)＝(ΔA-0.0057)÷1.9244×V 反总÷(W×V 样÷V 样总)÷T×1000=363.7×(ΔA -0.0057)÷W。

（3） 按细菌或细胞密度计算

单位定义：每 1 万个细菌或细胞每min 催化谷an酰胺生成 1nmol 氨定义为一个酶活力单位。

GLS(nmol/min/10⁴ cell)＝(ΔA-0.0057)÷1.9244×V 反总÷(500×V 样÷V 样总) ÷T ×1000 =0.7274×(ΔA

-0.0057)

V 样总：加入提取液体积，1 ml；T：反应时间，60min；V 反总：反应体系总体积，1.05ml；V 样：加入反应体系中样本体积，0.025ml；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/ml；W：样本质量，g；500：细菌或细胞总数， 500 万; 1000，μmol 到nmol 换算系数。

谷an酰胺酶活性测定试剂盒   氮代谢系列