总巯基测定试剂盒说明书

微量法 100T/48S

正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定测定意义：

生物体内巯基主要包括谷胱gan肽巯基和蛋白质巯基。前者不仅能够修复氧化损伤的蛋白质，而且参与活性氧清除，后者对于维持蛋白质构象具有重要作用。通过测定总巯基含量和GSH 含量，能够间接测定蛋白质巯基含量。

测定原理：

巯基基团与 5,5’-二硫代-双-硝基苯甲酸（DTNB）反应，生成黄色化合物，在 412nm 处有最大吸收峰。

总巯基测定试剂盒 抗氧系列-常备现货

组成：

自备仪器和用品：

天平、研钵、恒温水浴锅、酶标仪、96 孔板、乙醇和蒸馏水。

样品的制备：

1. 按照组织质量（g）：水体积(ml)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1ml 蒸馏水）进行冰浴匀浆，然后 8000g，4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。

2. 血清，培养液：稀释 5 倍后测定，可取 0.1ml 样本，加入 0.4ml 蒸馏水，混匀，置冰上待测。

测定操作表：

1、酶标仪预热 30min，调节波长至 412nm。

2、操作表

在 96 孔板中加入如下试剂

计算公式：

总巯基标准曲线：y = 1.8111x - 0.0037，R² = 1，x 为标品浓度，单位μmol/ml，y 为吸光度ΔA。

1. 组织：

（1） 按样本重量计算

总巯基含量（μmol/g 鲜重）=（ΔA+0.0037）÷1.8111×V 样总÷W

=0.552×（ΔA+0.0037）÷W

（2） 按样本蛋白浓度计算

总巯基含量（μmol/mg prot）=（ΔA+0.0037）÷1.8111×V 样总÷Cpr

=0.552×（ΔA+0.0037）÷Cpr

2. 血清、培养液：

总巯基含量（μmol/L）=（ΔA+0.0037）÷1.8111×5×10³

=2761×（ΔA+0.0037）

V 样总：加入提取液体积，1ml；W：样品质量，g ；Cpr：样本蛋白浓度，mg/ml；5：血清，培养液等液体样本稀释倍数；10³ ：1mmol/ L=10³μmol/ L

注意事项：

zui低检出限为 10μmol/L。

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