高铁还原酶（ferric-chelate reductase,FCR）试剂盒说明书

分光光度法 50 管/48 样

正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定测定意义：

高铁还原酶（ferric-chelate reductase,FCR）催化高价铁螯合物中的Fe3+还原为Fe2+，在部分物种铁元素的吸收中有重要作用。

测定原理：

FCR 催化Fe³⁺还原为Fe²⁺，Fe²⁺和ferrozine 反应显色，在 562nm 下有特征吸光值。

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试剂组成和配制：

需自备仪器和用品：

可见分光光度计、台式离心机、可调式移液器、1ml 玻璃比色皿、研钵、冰和蒸馏水。

具体产品的参数以收到产品说明书的参数为准

粗酶液提取：

按照组织质量（g）：水ml)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1ml 蒸馏水），进行冰浴匀浆。10000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。

测定步骤：

1、分光光度计或酶标仪预热 30min 以上，调节波长至 562nm，蒸馏水调零。

2、工作液配制：将试剂一、二、三以 1:1:1 的比例混合。临用前配制，用多少配多少

3、在 1ml 玻璃比色皿中，加入 250μl 样本上清和 750μl 工作液，混匀，记录初始吸光值A1 和 30min后的吸光值A2。ΔA=A2-A1。

FCR 活性计算公式：

标准曲线：y = 8.0014x + 0.0011，R2 = 0.9997；

按样本质量计算

单位定义：每 g 样本每分钟产生 1nmolFe2+-ferrozine 定义为一个酶活力单位。

FCR（nmol/min/g 鲜重）=（△A-0.0011）÷ 8.0014×1000×V 标÷(V 样÷V 样总×W)÷T = 4.166×（△A-0.0011）÷W

按样本蛋白浓度计算

单位定义：每 mg 蛋白每分钟产生 1nmolFe2+-ferrozine 定义为一个酶活力单位。

FCR（nmol/min/mg prot）=（△A-0.0011）÷8.0014×1000×V 标÷(V 样÷V 样总×Cpr)÷T =4.166×

（△A-0.0011）÷Cpr

V 样总：加入提取液体积，1 ml；V 样：反应中样品体积，250μl；V 标：加入标准品体积 ，250μl；

T：反应时间，30min；W：样品质量，g；Cpr：样本蛋白浓度，mg/ml；1000，μmol 到nmol 的转换系数。

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