亚铁氧化酶（Hephaestin,HP）试剂盒说明书

分光光度法 50 管/24 样

正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定测定意义：

Hephaestin (HP)作为铜蓝蛋白的同系物,是近年来发现的铁转运蛋白亚铁氧化酶，HP 属亚铁氧化酶家

族成员,具有亚铁氧化酶的活性,参与体内铁代谢。HP 的表达可受铁、铜及锌等金属离子的调节。HP 催化

Fe²⁺氧化生成Fe³⁺，在介导铁的跨膜转运中有重要作用。

测定原理：

HP 催化Fe²⁺氧化为Fe³⁺，Fe²⁺和ferrozine 反应显色，在 560 nm 下有特征吸光值。通过测定 Fe²⁺的减少速率可测得亚铁氧化酶的活性。

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试剂组成和配制：

需自备仪器和用品：

可见分光光度计、台式离心机、可调式移液器、1ml 玻璃比色皿、研钵、冰和蒸馏水。

具体产品的参数以收到产品说明书的参数为准

粗酶液提取：

按照组织质量（g）：水ml)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1ml 蒸馏水），进行冰浴匀浆。10000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。

测定步骤：

1、分光光度计预热 30min 以上，调节波长至 560 nm，蒸馏水调零。

2、在玻璃比色皿中加入下列试剂：

混匀，立即测定A 对照和A 测定，ΔA=A 对照-A 测定。(每个测定管需设一个对照管)：

HP 活性计算:

标准曲线：y = 16.427x - 0.0006，R² = 0.9998；(x 为标准品浓度，μmol/ml；y 为吸光值ΔA)

（1） 按样本质量计算

单位定义：每 g 样本每分钟氧化 1nmol Fe²⁺定义为一个酶活力单位。

HP（nmol/min/g 鲜重）=（△A+0.0006）÷ 16.427×V 总÷T ÷(W× V 样÷V 样总)× 1000= 20.29×

（△A+0.0006）÷W

（2） 按样本蛋白浓度计算

单位定义：每 mg 蛋白每分钟氧化 1nmol Fe²⁺定义为一个酶活力单位。

HP（nmol/min/mg prot）=（△A+0.0006）÷ 16.427×V 总÷T ÷（Cpr×V 样）× 1000 = 20.29×（△A+0.0006）÷Cpr

V 总：反应体系体积，0.1 ml；V 样：加入样本体积 0.01 ml；V 样总：加入提取液体积，1 ml；T：反应时间，30min；W：样品质量，g；Cpr：样本蛋白浓度，mg/ml；1000，μmol 到nmol 的转换系数。

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