土壤过氧化氢酶(Solid-Catalase,S-CAT)试剂盒说明书
微量法 100 管/48 样
S-CAT 是土壤微生物代谢的重要酶类,在 H2O2 清除系统中具有重要作用。
H2O2 在 240nm 下有特征吸收峰,通过测定与土壤反应后溶液在此波长下吸光度的变化,即可反应
S-CAT 活性的高低。
产品名称 | BO6004-100T/48S | Storage |
试剂一:液体 | 300μl | 4℃ |
试剂二:粉剂 | 1 瓶 | 4℃ |
试剂三:液体 | 3ml | 4℃ |
说明书 | 一份 |
试剂一:液体 300μl×1 瓶,4℃保存;临用前加入 29.7ml 蒸馏水充分溶解后待用;用不完的试剂 4℃
保存;
试剂二:粉剂×1 瓶,4℃保存;临用前加入 1ml 蒸馏水充分溶解待用,用不完的试剂 4℃保存(如出现结晶析出,60℃-90℃水浴溶解后使用)。
具体产品的参数以收到产品说明书的参数为准
紫外分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、微量石英比色皿/96 孔板(UV 板)和蒸馏水。
新鲜土样自然风干或 37 度烘箱风干,过 30~50 目筛。
1、分光光度计或酶标仪预热 30min 以上,调节波长至 240nm,蒸馏水调零。
2、测定前务必准备 96 孔UV 板一块(UV 板不是普通酶标板,普通酶标板只能透过可见光,不能透过紫外光,检测波长小于 340nm 务必使用UV 板)。
3、加样表。
试剂名称 | 测定管 | 无基质管 | ||
风干土样(g) | 0.03 | 0.03 | ||
试剂一(μl) | 260 | |||
蒸馏水(μl) | 260 | |||
25℃振荡培养 20min | ||||
试剂二(μl) | 10 | 10 | ||
混匀 8000g,25℃离心 5min,取 180uL 上清 | ||||
试剂三(μl) | 20 | 20 | ||
混匀, 240nm 处记录各管吸光值A。 |
每个测定管要设一个无基质管,无土管只要做一管。
a. 用微量石英比色皿测定的计算公式如下
单位的定义:每天每g 风干土样催化 1μmol H2O2 降解定义为一个酶活力单位。
计算公式:S-CAT(μmol/d/g)=[(A 无土管-A 测定管+A 无基质管)×V 反总÷(ε×d)×106]÷W÷T=16.5×(A 无土管-A 测定管+A 无基质管)
V 反总:反应体系总体积,3×10-4 L;ε:过氧化氢摩尔消光系数,4.36×104 L / mol /cm;d:比色皿光径,1cm; T:反应时间,20 min=1/72d; W:样本质量,0.03g。
单位的定义:每天每g 风干土样催化 1μmol H2O2 降解定义为一个酶活力单位。
计算公式:S-CAT(μmol/d/g)=[(A 无土管-A 测定管+A 无基质管)×V 反总÷(ε×d)×106]÷W÷T=33×(A 无土管-A 测定管+A 无基质管)
V 反总:反应体系总体积,3×10-4 L;ε:过氧化氢摩尔消光系数,4.36×104 L / mol /cm;d:96 孔板光径,0.5cm; T:反应时间,20 min=1/72d; W:样品质量,0.03g。
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