羟甲基戊二酰fu酶A 合成酶（HMGCS）试剂盒说明书

分光光度法 50 管/48 样

正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定测定意义：

羟甲基戊二酰fu酶A 合成酶是甲羟戊酸代谢途径中的关键酶，催化乙酰 CoA 与乙酰乙酰CoA 生成羟甲基戊二酰CoA。

测定原理：

HMGCS 催化乙酰CoA 与乙酰乙酰CoA 生成羟甲基戊二酰CoA，同时产生 CoASH，使 DTNB 转化为黄色的TNB，在 412nm 下有特征吸光值。

羟甲基戊二酰fu酶A合成酶试剂盒  三羧酸

组成：

试剂一：粉剂×1 瓶，-20℃避光保存；临用前加入 7ml 蒸馏水充分溶解待用；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融；

试剂二：粉剂×1 瓶，-20℃避光保存；临用前加入 7ml 蒸馏水充分溶解待用；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融；

具体产品的参数以收到产品说明书的参数为准

自备仪器和用品：

可见分光光度计、台式离心机、可调式移液器、1 ml 玻璃比色皿、研钵、冰和蒸馏水。

样本测定的准备：

1、细菌、细胞或组织样品的制备：

细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（10⁴ 个）：提取液体积（ml）为 500~1000：1 的比例（建议 500 万细菌或细胞加入 1ml 提取液），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率 20％或 200W，超声 3s，间隔 10s，重复 30 次）；8000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。

组织：按照组织质量（g）：提取液体积(ml)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入1ml 提取液），进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。

2、血清（浆）样品：直接检测。

测定步骤：

1、分光光度计预热 30min 以上，调节波长至 412nm，蒸馏水调零。

2、在 1 ml 玻璃比色皿中加入 125μl 试剂一、125μl 试剂二和 250μl 试剂三，混匀，加入 500μl 样本上清，迅速混匀后记录 412nm 下初始吸光值A1 和 4min 后的吸光值A2。计算ΔA＝A2-A1。

HMGCS 活性计算：

1、血清（浆）活性

单位定义：每ml 血清（浆）每分钟催化产生 1nmolTNB 为一个酶活力单位。

HMGCS（nmol/min /ml）=[ΔA×V 反总÷（ε×d）×10⁹]÷V 样 ÷T=36.76×ΔA 2、组织、细菌或细胞HMGCS 活性

(1) 按样本蛋白浓度计算

单位定义：每mg 组织蛋白每分钟催化产生 1nmolTNB 为一个酶活力单位。

HMGCS（nmol/min /mg prot）＝[ΔA×V 反总÷（ε×d）×10⁹]÷(V 样×Cpr) ÷T=36.76×ΔA÷Cpr

（2） 按样本鲜重计算

单位定义：每g 组织每分钟催化产生 1nmolTNB 为一个酶活力单位。

HMGCS（nmol/min /g 鲜重）＝[ΔA×V 反总÷（ε×d）×10⁹]÷（W ×V 样÷V 样总）÷T=36.76×ΔA÷W

（3） 按细菌或细胞密度计算

单位定义：每 1 万个细菌或细胞每分钟催化产生 1nmolTNB 为一个酶活力单位。

HMGCS（nmol/min /10⁴ cel）＝[ΔA×V 反总÷（ε×d）×10⁹]÷（500×V 样÷V 样总）÷T=0.074×ΔA

V 反总：反应体系总体积，1×10^-3 L；ε：TNB 摩尔消光系数，1.36×10⁴ L / mol /cm；d：比色皿光径，1cm； V 样：加入样本体积，0.5 ml；V 样总：加入提取液体积，1ml；T：反应时间，4 min；Cpr：样本蛋白质 浓度，mg/ml；W：样本质量，g；500：细胞或细菌总数，500 万。

羟甲基戊二酰fu酶A合成酶试剂盒  三羧酸