还原糖含量试剂盒说明书

微量法 100 管/48 样

正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定测定意义：

还原糖广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中。植物体内的还原糖主要包括葡萄糖、果糖和麦芽糖等，是最常见的单糖和双糖，其中葡萄糖和果糖不仅是呼吸作用的主要底物，也是进一步合成蔗糖、淀粉和纤维素的底物。

测定原理：

加热促进碱性溶液中3,5-二硝基水杨酸溶液与还原糖生成棕红色氨基化合物，在540nm 有特征吸收峰；在一定的浓度范围内，还原糖含量与 540nm 吸光度成线性关系，根据标准曲线，即可求出样品中还原糖的量。

还原糖含量试剂盒   氨基酸系列-常备现货

组成：

自备仪器和用品：

可见分光光度计/酶标仪、水浴锅、可调式移液器、微量石英比色皿/96 孔板、研钵、蒸馏水。

具体产品的参数以收到产品说明书的参数为准

样品中还原糖的提取：

1、细菌或细胞的处理：收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（104 个）：试剂一体积（ml）为 500~1000：1 的比例（建议 500 万细菌或细胞加入 1ml 试剂一），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率 20％或 200W，超声 3S，间隔 10S，重复 30 次），转移到有盖离心管中（防止加热时水分散失），80℃水浴中 40min 并且振荡 8~10 次，8000g，25℃离心 10min，取上清供测定用。

2、组织的处理：按照组织质量（g）：试剂一体积(ml)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1ml试剂一），冰浴匀浆，转移到有盖离心管中（防止加热时水分散失），80℃水浴中 40min 并且振荡 8~10次，8000g 吧，25℃离心 10min，取上清供测定用。

3、血清（浆）的处理：按照血清（浆）体积（ml）：试剂一体积(ml)为 1：5~10 的比例（建议取 0.1ml 血清（浆）加入 1ml 试剂一），冰浴匀浆，转移到有盖离心管中（防止加热时水分散失），80℃水浴中 40min并且振荡 8~10 次，8000g，25℃离心 10min，取上清供测定用。

测定步骤：

1、分光光度计或酶标仪预热 30min 以上，调节波长至 540nm，蒸馏水调零。

2、调节水浴锅至 95℃。

3、在EP 管中加入下列试剂：

混匀，在 95℃水浴中加热 5min（盖紧，防止水分散失），取出后立即冷却至室温，混匀。取 200μl 至微量石英比色皿或 96 孔板中，540nm 波长下读取对照管和测定管吸光值。计算ΔA=A 测定-A 对照。每个测定管需设一个对照管。

注意：如果ΔA 大于 2，需要将样本用试剂一稀释，计算公式中乘以相应稀释倍数（若显色后出现分层现象，可改用蒸馏水稀释）。

还原糖含量计算：

a. 用微量石英比色皿测定的计算公式如下

1、标准条件下测定回归方程为 y = 8.3796x- 0.3034；x 为标准品浓度（mg/ml），y 为吸光值。

2、按样本鲜重计算：

还原糖(μg/g 鲜重)=[1000×(ΔA＋0.3034)÷ 8.3796×V1]÷(W×V1÷V2)=119.34×(ΔA＋0.3034)÷W

3、按样本蛋白浓度计算：

还原糖(μg/mg prot)=[1000×(ΔA＋0.3034)÷ 8.3796×V1]÷(V1×Cpr)=119.34×(ΔA＋0.3034)÷Cpr

4、按细菌或细胞密度计算：

还原糖(μg /104 cell)=[1000×(ΔA＋0.3034)÷ 8.3796×V1]÷（500×V1÷V2）=0.239×(ΔA＋0.3034)

5、按血清（浆）体积计算：

还原糖(μg/ml)=[1000×(ΔA＋0.3034)÷ 8.3796×V1]÷（V3×V1÷V2）=1193.4×(ΔA＋0.3034)

1000：1mg/ml=1000µg/ml；V1：加入样本体积，0.175ml；V2：加入试剂一体积，1 ml；V3：加入血清（浆体积），0.1ml；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/ml；W：样本质量，g；500：细菌或细胞总数，500 万。

b. 用 96 孔板测定的计算公式如下

1、标准条件下测定回归方程为 y = 4.1898x - 0.3034， R2 = 0.9997；x 为标准品浓度（mg/ml），y 为吸光值。

2、按样本鲜重计算：

还原糖(μg/g 鲜重)＝[1000×(ΔA＋0.3034)÷4.1898×V1]÷(W×V1÷V2)=238.67×(ΔA＋0.3034)÷W

3、按样本蛋白浓度计算：

还原糖（μg/mg prot）= [1000×(ΔA＋0.3034)÷4.1898×V1]÷(V1×Cpr)=238.67×(ΔA＋0.3034)÷Cpr

4、按细菌或细胞密度计算：

还原糖（μg/104 cell）= [1000×(ΔA＋0.3034)÷4.1898×V1]÷（500×V1÷V2）=0.477×(ΔA＋0.3034)

5、按血清（浆）体积计算：

还原糖（μg/ml）＝[1000×(ΔA＋0.3034)÷4.1898×V1]÷（V3×V1÷V2）=2386.7×(ΔA＋0.3034)

1000：1mg/ml=1000µg/ml；V1：加入样本体积，0.175ml；V2：加入试剂一体积，1 ml；V3：加入血清（浆体积），0.1ml；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/ml；W：样本质量，g；500：细菌或细胞总数，500 万。

注意：zui低检测限为1mg/g 鲜重或 10μg/mg prot

还原糖含量试剂盒   氨基酸系列-常备现货