销售咨询热线：
13269190901
二氢黄酮醇还原酶（Dihydro flavonol reductase，DFR）试剂盒说明书
微量法 100T/48S
二氢黄酮醇还原酶是类黄酮合成途径中的一个关键酶，在决定植物的花色、叶色、果色和其他经济器官的色泽及其营养品质方面起着重要作用。
二氢黄酮醇还原酶作用于二氢槲皮素产生儿茶素，可与香cao醛缩合形成红色化合物，在 500nm 处有特征吸收峰。
产品名称 | BD6020-100T/48S | Storage |
提取液：液体 | 100ml | 4℃ |
试剂一：液体 | 12ml | 4℃ |
试剂二：液体 | 1.5ml | 4℃ |
试剂三：粉剂 | 1 瓶 | 4℃ |
试剂四：液体 | 30ml | 4℃避光 |
说明书 | 一份 | |
试剂三：临用前加 2ml 蒸馏水溶解；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。
研钵、低温离心机、震荡仪、氮吹仪、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96 孔板、水浴锅、无水乙醇、乙酸乙酯。
组织：按照组织质量（g）：提取液体积(ml)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1ml 提取液），进行冰浴匀浆。10000g ，4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
1、分光光度计/酶标仪预热 30min，调节波长至 500nm。
2、操作表
对照管 | 测定管 | |||
酶液（μl） | 40 | 40 | ||
试剂一（μl） | 140 | 120 | ||
试剂二（μl） | 20 | |||
试剂三（μl） | 20 | 20 | ||
混匀，30℃反应 30min | ||||
乙酸乙 | 200 | 200 | ||
37℃震荡 10min，取上层溶液，N2 吹干 | ||||
无水乙醇（μl） | 100 | 100 | ||
充分震荡 | ||||
试剂四(μl) | 300 | 300 | ||
混匀，25℃静置 10min，于微量石英比色皿/96 孔板中测定 500nm 处吸 光值A。分别记为A 对照管和A 测定管，△A=A 测定管-A 对照管 | ||||
a. 用微量石英比色皿测定的计算公式如下标准曲线：y=0.0184x+0.0002，R2=0.999
（1） 按照蛋白浓度计算
酶活性定义：在 30℃，pH7.5 条件下，每毫克蛋白每分钟分解二氢槲皮素产生 1mmol 儿茶素所需的酶量为一个酶活力单位。
DFR 活性（mmol/min/mg prot）=（△A-0.0002）÷0.0184×V 反总÷（V 样×Cpr）÷T÷2
= 9.06×（△A-0.0002）÷Cpr
（2） 按照样本质量计算
酶活性定义：在 30℃，pH7.5 条件下，每克组织每分钟分解二氢槲皮素产生 1mmol 儿茶素所需的酶量为一个酶活力单位。
DFR 活性（mmol/min/g 鲜重）= （△A-0.0002）÷0.0184×V 反总÷（V 样×W÷V 样总）÷T÷2
= 9.06×（△A-0.0002）÷W
V 反总：反应总体积，1ml；V 样：反应体系中样本体积，0.1ml；V 样总：加入提取液体积，1ml；Cpr：样本蛋白浓度，mg/ml；W，样本质量，g；T：反应时间，30min
b. 用 96 孔板测定的计算公式如下
标准曲线：y=0.0092x+0.0002，R2=0.999
（1） 按照蛋白浓度计算
酶活性定义：在 30℃，pH7.5 条件下，每毫克蛋白每分钟分解二氢槲皮素产生 1mmol 儿茶素所需的酶量为一个酶活力单位。
DFR 活性（mmol/min/mg prot）=（△A-0.0002）÷0.0092×V 反总÷（V 样×Cpr）÷T÷2
= 9.06×（△A-0.0002）÷Cpr
（2） 按照样本质量计算
酶活性定义：在 30℃，pH7.5 条件下，每克组织每分钟分解二氢槲皮素产生 1mmol 儿茶素所需的酶量为一个酶活力单位。
DFR 活性（mmol/min/g 鲜重）= （△A-0.0002）÷0.0092×V 反总÷（V 样×W÷V 样总）÷T÷2
= 9.06×（△A-0.0002）÷W
V 反总：反应总体积，1ml；V 样：反应体系中样本体积，0.1ml；V 样总：加入提取液体积，1ml；Cpr：样本蛋白浓度，mg/ml；W，样本质量，g；T：反应时间，30min
电话
微信扫一扫
