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二胺氧化酶（Diamine Oxidase，DAO）试剂盒说明书
微量法 100T/48S
DAO(EC1.4.3.6)广泛存在于动物（肠粘膜、肺、肝脏、肾脏等）、植物和微生物中。催化多胺氧化为醛，其活性与核酸和蛋白合成密切相关，能够反映肠道机械屏障的完整性和受损伤程度。
DAO 催化尸胺产生醛和过氧化氢，外源添加过量的辣根过氧化物酶，催化过氧化氢氧化邻联茴香胺生成氧化型邻联茴香胺，在 460nm 处有特征吸收峰，通过测定该波长吸光度增加速率，计算 DAO 活性。
产品名称 | BC6018-100T/48S | Storage |
提取液：液体 | 120ml | 4℃ |
试剂一：液体 | 0.3ml | 4℃ |
试剂二：液体 | 2.5ml | 4℃ |
试剂三：液体 | 1.2ml | 4℃ |
说明书 | 一份 | |
需自备仪器和用品：
天平、低温离心机、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96 孔板、蒸馏水。
1、组织：按照组织质量（g）：提取液体积(ml)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1ml
提取液）进行冰浴匀浆，然后 10000g，4℃离心 20min，取上清，置冰上待测。
2、细菌、真菌：按照细胞数量（104 个）：提取液体积（ml）为 500~1000：1 的比例（建议 500 万细胞加入 1ml 提取液），冰浴超声波破碎细胞（功率 300w，超声 3 秒，间隔 7 秒，总时间 3min）；然后 10000g， 4℃，离心 10min，取上清置于冰上待测。
3、血清等液体：直接测定
1、分光光度计预热 30min 以上，调节波长至 460nm，蒸馏水调零。
2、加样表
对照管 | 测定管 | |||
粗酶液（μl） | 50 | 50 | ||
提取液（μl） | 128 | 108 | ||
试剂一（μl） | 2 | 2 | ||
试剂二（μl） | 20 | 20 | ||
试剂三（μl） | 20 |
混匀，37℃水浴 30min，微量石英比色皿/96 孔板，蒸馏水调零，测定 460nm 吸光值。ΔA=A 测定-A对照。
（1） 按样本蛋白浓度计算：
酶活性定义：在pH7.2，温度为 37℃条件下，每毫克组织蛋白每分钟催化产生 1nmol H2O2 所需的酶量为一个酶活力单位（U）。
（2） 按样本质量计算：
DAO 活性（nmol/min/mg prot）=A460 ×V 反总÷（V 样×Cpr）÷T= 18×A460÷Cpre´ d
酶活性定义：在pH7.2，温度为 37℃条件下，每克组织每分钟催化产生 1nmol H2O2 所需的酶量定义
为一个酶活力单位。
（3） 按细胞数量计算：
DAO 活性（nmol/min/g 鲜重）=A460 ×V 反总÷（V 样÷V 样总×W）÷T= 18×A460÷We´ d
酶活性定义：在pH7.2，温度为 37℃条件下，每 104 个细胞每分钟催化产生 1nmol H2O2 所需的酶量
定义为一个酶活力单位。
DAO 活性（nmol/min/104cell）=A460 ×V 反总÷（V 样÷V 样总×细胞数量）÷T= 18×A460÷细胞数量e´ d
(4) 按液体体积计算
酶活性定义：在pH7.2，温度为 37℃条件下，每毫升血清每分钟催化产生 1nmol H2O2 所需的酶量定义为一个酶活力单位。
DAO 活性（nmol/min/ml）=A460 ×V 反总÷V 样÷T= 18×A460
e´ d
ε：氧化型邻联茴香胺毫摩尔消光系数：7.5 L/mmol/cm；d：比色皿光径，1cm；V 反总：反应总体积， 0.2ml；V 样：反应中样本体积，0.05ml；V 样总：加入提取液体积，1ml；Cpr：样本蛋白浓度，mg/ml； W：样本质量，g；T：反应时间，30min
（1） 按样本蛋白浓度计算：
酶活性定义：在pH7.2，温度为 37℃条件下，每毫克组织蛋白每分钟催化产生 1nmol H2O2 所需的酶量为一个酶活力单位（U）。
（2） 按样本质量计算：
DAO 活性（nmol/min/mg prot）=A460 ×V 反总÷（V 样×Cpr）÷T= 36×A460÷Cpre´ d
酶活性定义：在pH7.2，温度为 37℃条件下，每克组织每分钟催化产生 1nmol H2O2 所需的酶量定义为一个酶活力单位。
（3） 按细胞数量计算：
DAO 活性（nmol/min/g 鲜重）=A460 ×V 反总÷（V 样÷V 样总×W）÷T= 36×A460÷We´ d
酶活性定义：在pH7.2，温度为 37℃条件下，每 104 个细胞每分钟催化产生 1nmol H2O2 所需的酶量
定义为一个酶活力单位。
(4) 按液体体积计算
DAO 活性（nmol/min/104cell）=A460 ×V 反总÷（V 样÷V 样总×细胞数量）÷T= 36×A460÷细胞数量e´ d
酶活性定义：在pH7.2，温度为 37℃条件下，每毫升血清每分钟催化产生 1nmol H2O2 所需的酶量定
义为一个酶活力单位。
DAO 活性（nmol/min/ml）=A460 ×V 反总÷V 样÷T= 36×A460 e´ d
ε：氧化型邻联茴香胺毫摩尔消光系数：7.5 L /mmol/cm；d：96 孔板光径，0.5cm；V 反总：反应总体积，0.2ml；V 样：反应中样本体积，0.05ml；V 样总：加入提取液体积，1ml；Cpr：样本蛋白浓度，mg/ml； W：样本质量，g；T：反应时间，30min。
1、如果OD 值小于 0.01，适当加大提取用样本量；OD 值大于 0.8，粗酶液可适当稀释，或者减少提取用样本量。
2、样品蛋白质含量需要另外测定。
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