植物花色苷含量试剂盒说明书

微量法 100 管/96 样

正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定测定意义：

花色苷是一类易溶于极性溶剂的天然色素，属黄酮类化合物。花色苷广泛存在于植物的根、茎、叶、花和果实中，使其呈现由红到紫等不同颜色，是植物主要的呈色物质。

测定原理：

采用pH 示差法测定花色苷含量，当 pH 为 1.0 时花色苷在 530nm 处有最大吸收峰,而当pH 为 4.5 时, 花色苷转变为无色查尔酮形式,在 530 处无吸收峰, 利用此特性分别测定在不同pH 下的 530nm 和 700nm 处的吸光度值。pH 示差法减少了溶液pH 和溶剂差异的影响，排除了其他非花色苷类物质对检测结果的干扰。

植物花色苷含量试剂盒   氧化系列

试剂的组成和配制：

需自备仪器和用品：

可见分光光度计/酶标仪、水浴锅、可调式移液器、微量石英比色皿/96 孔板、研钵和蒸馏水。

花色苷的提取：

按照烘干样品质量（g）：提取液体积(ml)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 烘干样品，加入 1ml 提取液），充分匀浆后转移到 EP 管中，提取液定容至 1 ml，盖紧后 4℃浸提 24 h，8000 g，常温离心 10 min，取上清液待测。

测定步骤：

1、分光光度计或酶标仪预热 30min 以上；试剂一和试剂二 25℃（室温）预热 10min 以上；

2、取 20 µl 上清液和 180 µl 试剂一（相当于稀释 10 倍），40℃水浴 20min，分别测定 530nm 和 700nm处的吸光值，分别记为A1 和A2。

3、 取 20 µl 上清液和 180 µl 试剂二（相当于稀释 10 倍），40℃水浴 20min，分别测定 530nm 和 700nm处的吸光值，分别记为A3 和A4。

4、 计算△A=(A1-A2)-(A3-A4)

注意：

如果A1 大于 1，可以适当加大稀释倍数，保证总体积 200 µl 不变，如 10 µl 上清液和 190 µl 试剂一（相当于稀释 20 倍）；如果 A1 小于 0.1，可以适当缩小稀释倍数，保证总体积不变，如 100 µl 上清液和 100 µl试剂一（相当于稀释 2 倍），使A1 保持在 0.1~1 范围内，可提高检测灵敏度；同样调整上清液和试剂二体积比例；计算时以实际稀释倍数代入下述公式中。

花色苷含量计算：

a. 用微量石英比色皿测定的计算公式如下

花色苷含量（µg/g 干重）=[ΔA×V÷（ε×d）×M×F×106]÷W=16.7×ΔA× F÷W

V：提取液体积，1×10-3L；ε：花色苷的摩尔消光系数，2.69×104 L / mol /cm；d：比色皿光径，1cm； M：花色苷的相对分子质量：449.2g/mol；F：稀释倍数；106：1g=106µg；W：样本干重：g。

b. 用 96 孔板测定的计算公式如下

花色苷含量（µg/g 干重）=[ΔA×V÷（ε×d）×M×F×106]÷W=33.4×ΔA× F÷W

V：提取液体积，1×10-3L；ε：花色苷的摩尔消光系数，2.69×104 L / mol /cm；d：96 孔板光径，0.5cm；

M：花色苷的相对分子质量：449.2g/mol；F：稀释倍数；106：1g=106µg；W：样本干重：g。 ΔA 线性范围为 0.005-0.5。

植物花色苷含量试剂盒   氧化系列