过氧化氢酶（Catalase，CAT）试剂盒(紫外吸收法)说明书

微量法 100 管/96 样

正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定测定意义：

CAT(EC 1.11.1.6)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，是最主要的H2O2 清除酶，在活性氧清除系统中具有重要作用。

测定原理：

H2O2 在 240nm 下有特征吸收峰，CAT 能够分解H2O2，使反应溶液 240nm 下的吸光度随反应时间而下降，根据吸光度的变化率可计算出 CAT 活性。

过氧化氢酶试剂盒(紫外吸收法)   抗逆系列

组成：

自备仪器和用品：

紫外分光光度计/酶标仪、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96 孔板（UV 板）、研钵、冰和蒸馏水

粗酶液提取：

1、细菌、细胞或组织样品的制备：

细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（104 个）：提取液体积（ml）为 500~1000：1 的比例（建议 500 万细菌或细胞加入 1ml 提取液），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率 20％或 200W，超声 3s，间隔 10s，重复 30 次）；8000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。

组织：按照组织质量（g）：提取液体积(ml)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1ml 提取液），进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。

2、血清（浆）样品：直接检测。

测定步骤：

1、分光光度计或酶标仪预热 30min 以上，调节波长至 240nm，蒸馏水调零。

2、测定前将CAT 检测工作液在 37℃（哺乳动物）或 25℃（其它物种）水浴 10min 以上。

3、准备 96 孔UV 板一块（非普通酶标板，普通酶标板只能透过可见光，不能透过紫外光，检测波长小于340nm 务必使用UV 板）。

4、在微量石英比色皿或 96 孔UV 板中加入 10μl 样本和 190μl 工作液，混匀，记录 240nm 下初始吸光值A1 和 1min 后的吸光值A2。计算ΔA＝A1-A2。

注意事项：出现负值怎么办？

首先检查吸光值是否超过 3，如果超过 3 很可能是没有用 UV 板，请换用UV 板。如果未超过 3，仍然出现负值则检查反应过程是否产生气泡，气泡多说明酶活性太高，气泡影响产生了负值，可以将样本用提取液稀释10 倍后再检测。如果稀释样本或反应体系没有产生气泡仍然出现较小的负值，说明该样本测不到该酶活。

CAT 活性计算：

a. 用微量石英比色皿测定的计算公式如下

1、血清（浆）CAT 活力的计算:

单位的定义：每毫升血清（浆）每分钟催化 1nmol H2O2 降解定义为一个酶活力单位。

CAT(nmol/min/ml)= [ΔA×V 反总÷（ε×d）×10⁹]÷V 样÷T=459×ΔA 2、组织、细菌或细胞中 CAT 活力计算：

（1） 按样本蛋白浓度计算：

单位的定义：每mg 组织蛋白每分钟催化 1nmol H2O2 降解定义为一个酶活力单位。

CAT(nmol/min/mg prot)=[ΔA×V 反总÷（ε×d）×10⁹]÷(V 样×Cpr) ÷T=459×ΔA÷Cpr

（2） 按样本鲜重计算：

单位的定义：每g 组织每分钟催化 1nmol H2O2 降解定义为一个酶活力单位。

CAT(nmol/min/g 鲜重)=[ΔA×V 反总÷（ε×d）×10⁹]÷(W× V 样÷V 样总)÷T=459×ΔA÷W

（3） 按细菌或细胞密度计算：

单位的定义：每 1 万个细菌或细胞每分钟催化 1nmol H2O2 降解定义为一个酶活力单位。

CAT(nmol/min/10⁴ cell)＝[ΔA×V 反总÷（ε×d）×10⁹]÷（500×V 样÷V 样总）÷T =0.917×ΔA

V 反总：反应体系总体积，2×10^-4 L；ε：H2O2 摩尔消光系数，4.36×10⁴ L / mol /cm；d：比色皿光径，1cm； V 样：加入样本体积，0.01 ml；V 样总：加入提取液体积，1 ml；T：反应时间，1 min；W：样本质量，g； Cpr：样本蛋白质浓度，mg/ml；500：细胞或细菌总数，500 万。

b. 用 96 孔板测定的计算公式如下

1、血清（浆）CAT 活力的计算:

单位的定义：每毫升血清（浆）每分钟催化 1nmol H2O2 降解定义为一个酶活力单位。

CAT(nmol/min/ml)=[ΔA×V 反总÷（ε×d）×10⁹]÷V 样÷T=918×ΔA 2、组织、细菌或细胞中 CAT 活力计算：

（1） 按样本蛋白浓度计算：

单位的定义：每mg 组织蛋白每分钟催化 1nmol H2O2 降解定义为一个酶活力单位。

CAT(nmol/min/mg prot)=[ΔA×V 反总÷（ε×d）×10⁹]÷(V 样×Cpr) ÷T =918×ΔA÷Cpr

（2） 按样本鲜重计算：

单位的定义：每g 组织每分钟催化 1nmol H2O2 降解定义为一个酶活力单位。

CAT(nmol/min/g 鲜重)=[ΔA×V 反总÷（ε×d）×10⁹]÷（W× V 样÷V 样总）÷T=918×ΔA÷W

（3） 按细菌或细胞密度计算：

单位的定义：每 1 万个细菌或细胞每分钟催化 1nmol H2O2 降解定义为一个酶活力单位。

CAT(nmol/min/10⁴ cell)=[ΔA×V 反总÷（ε×d）×10⁹]÷（500×V 样÷V 样总）÷T=1.836×ΔA

V 反总：反应体系总体积，2×10^-4 L；ε：H2O2 摩尔消光系数，4.36×10⁴ L / mol /cm；d：96 孔板光径，0.5cm； V 样：加入样本体积，0.01 ml；V 样总：加入提取液体积，1 ml；T：反应时间，1 min；W：样本质量，g；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/ml；500：细胞或细菌总数，500 万。

过氧化氢酶试剂盒(紫外吸收法)   抗逆系列