产品货号：C9148
产品名称：T7pLysY感受态细胞
产品规格：10*100ul
产品简介：
储存条件：-70℃
T7pLysY感受态细胞 载体构建

诺博莱德  T7pLysY感受态细胞

T7pLysY感受态细胞   载体构建 

产品货号：C9148

产品名称：T7pLysY感受态细胞

产品规格：10*100ul

产品简介：

储存条件：-70℃

具体产品的参数以收到产品说明书的参数为准

NobleRyderC9148  T7pLysY感受态细胞为大肠杆菌BL21增强型菌株，为Lon和OmpT蛋白酶缺陷型，用于毒性或非毒性蛋白的表达。该菌株区别于BL21(DE3)pLysS和BL21(DE3)pLysE菌株的优势在于T7RNA聚合酶基因整合在细菌染色体上的lac操纵子区域，基因组中无λ前噬菌体序列，LysY 表达的T7溶jun酶保留了对T7RNA 聚合酶的抑制作用但缺失了水解细胞壁的酰胺酶活性，有利于降低基因的背景表达和避免诱导过程中细菌的裂解，菌株具有抗T1噬菌体感染等特点。T7pLysY 表达感受态细胞经特殊工艺制作，pUC19质粒检测转化效率大于108cfu/μg

基因型:

fhuA2lacZ::T7gene1[lon]ompTgalsulA11R(mcr-73::miniTn10--TetS )2[dcm]R(zgb-210::Tn10--TetS )endA 1D(mcr C-mrr)114::IS10 lysY (CamR)

菌株抗性：对氨苄青mei素，壮观mei素，卡na霉素，链mei素和四环素敏感，对氯mei素有抗性。

操作方法：（以下操作均按无菌条件的标准进行）

1. 将感受态细胞置于冰水浴中化冻。待细胞刚化冻后，加入质粒DNA 到细胞中，用手指bo打管底，轻轻混匀；

2. 冰水浴中静置15-30分钟；

3. 42℃热击60秒钟，不要晃动；

4. 冰水浴中静置2分钟；

5. 加入500μL无菌的SOC或LB培养基；

6. 置于37℃摇床中，150-200rpm震荡复苏培养60分钟；

7. 取50-100μL 菌液涂布在含34µg/ml氯mie素及所选质粒筛选抗生素的LB平板上。待液体吸干后，倒置平板，37℃培养12-16小时。

（平板划线分离法：复苏培养结束后，12000rpm 离心30秒钟，弃掉上清，留100μL左右的液体，用200μL吸头轻轻吹打散菌块，取10μL重悬的菌液分多点滴在抗性LB平板上，倾斜吸头，用吸头头部的侧面将滴在平板上的液体来回划线。37℃培养过夜。这个方法可以获得更多更大的单克隆菌落。）

注意事项：

1．感受态细胞应保存在-70℃，不可反复冻融，否则其转化效率将会降低。

2．实验过程中应严格无菌操作，防止其它DNA或杂菌的污染，避免为以后的筛选、鉴定带来影响。

3．转化时，转化效率与外源DNA的浓度在一定范围内成正比，但当加入的外源DNA量过多或体积过大反而会降低转化效率。转化时DNA体积要小于感受态细胞体积的十分之一。

T7pLysY感受态细胞   载体构建 

产品订购信息

C9148  T7pLysY感受态细胞  10*100ul