NobleRyder PE8818 West Femto ECL超敏发光液,West Femto ECL Substrate用于检测直接或间接标记辣根过氧化物酶HRP的抗体及其关联的抗原。
West Femto ECL超敏发光液 显色与信号检测

诺博莱德West Femto ECL超敏发光液,West Femto ECL Substrate

West Femto ECL超敏发光液 显色与信号检测

产品货号：PE8818

产品名称：West Femto ECL超敏发光液,West Femto ECL Substrate

产品规格：2*12.5ml / 2*50ml

产品简介：

英文名称：West Femto ECL Substrate

中文名称：West Femto ECL超敏发光液

规格：2*12.5ml ; 2*50ml

纯度：＞99%

储存条件：2-8℃，1 year

具体产品的参数以收到产品说明书的参数为准

产品介绍：

NobleRyder PE8818 West Femto ECL超敏发光液,West Femto ECL Substrate用于检测直接或间接标记辣根过氧化物酶HRP的抗体及其关联的抗原。由于采用了du特的发光底物系统，West Femto ECL超敏发光液是目前zui灵敏的商业化荧光ECL检测试剂：
(1) 具有ji高灵敏度和高信噪比，可检测10～100 fg抗原;
(2) 可在日光灯下进行发光操作;
(3) 发光迅速，荧光可使X光胶片感光达12小时以上，特别适用于痕量蛋白或核酸检测;
(4) 可使用更高的抗体稀释倍数(1:2000～1:10000)，极其节省抗体。
2. 用途：用于HRP标记抗体的Western Blot和HRP标记探针的核酸杂交。
3. 使用方法:
(1)执行常规SDS-PAGE、转膜和Western Blot步骤。注意用HRP标记lgG或用一抗-链亲和素-生wu素-HRP夹法。
(2)Western Blot最后一次洗膜的同时新鲜配制发光工作液：分别取等体积的溶液A和B，放入干净容器中混合。建议立即使用工作液，室温放置数小时后仍可使用但灵敏度略有降低。
(3)用镊子取出膜，搭在滤纸上沥干洗液但勿使膜wan全干燥。将膜wan全浸入发光工作液(0.125mL发光工作液/cm2膜)中，与发光工作液充分接触。室温孵育3分钟，准备立即压片曝光。孵育时间过长不会增加灵敏度，有时还会导致曝光条带异常。发光过程的本质是酶促反应，使用过少的发光工作液不利反应进行，也会导致膜上条带曝光不均和明显降低灵敏度。为达节约目的可将膜剪小但勿降低发光液用量。
(4)用镊子夹起膜，搭在滤纸上沥干发光工作液。但勿洗去发光液。
(5)打开X光胶片暗盒，在暗盒内表面铺一张面积大于膜的保鲜膜。将Western Blot膜贴在保鲜膜上，将保鲜膜折起来wan全包裹Western Blot膜，去除气泡和皱褶，可剪去边缘部多余的保鲜膜。用滤纸吸去多余的发光工作液。用胶带将覆盖Western Blot膜的保鲜膜固定在暗盒内，蛋白带面向上。
(6)暗房内压X光胶片，分别曝光不同的时间如数秒到数分钟。显影冲洗。
4. 储存：4  ℃密封避光保存一年以上。短期可放置室温。
5. 安全性：无特殊毒性，按普通化学品处理。
6. 注意事项：
(1)步骤1～5可在日光灯下操作;但发光液曝露于强光下时间过久灵敏度可能略有降低，移到暗房操作可避免之。戴手套可以避免在膜上留下手印。
(2)长时间曝光或蛋白过量，将加深背景并使条带强弱变化失去线性关系。曝光不足则条带模糊。
(3)发光工作液孵育约3分钟后膜上的条带发光。强条带发光在暗房中肉眼可见，低丰度蛋白条带发光较弱甚至肉眼不可见但可使X光胶片曝光。不能简单以肉眼观察判断条带发光时间。肉眼不可见的荧光实际上可持续数小时并使X光胶片感光，因而弱带可曝光1-10小时。如果曝光后条带不佳，可用洗膜缓冲液洗膜，重新孵育二抗，然后重新用ECL发光和曝光。
(4)由于超敏发光液极其灵敏，强烈推荐大多数进口抗体起始浓度为一抗1:1000～1:4000，二抗1:2000～1:5000。抗体浓度过高将造成高背景或没有条带，导致失败。
(5)某些保鲜膜包裹印迹膜时可能会淬灭荧光，应选择高质量保鲜膜。
(6)使用肉眼可见的预染色蛋白Marker和荧光-放射自显影曝光标签可精确确定胶片上条带的位置和大小。

(7)NaN3能抑制HRP活性，回收第二抗体应避免使用NaN3，如必需使用勿超过0.01%。

 备注：产品信息可能会有优化升级。请以实际标签信息为准。    

操作概述：

注：优化抗原和抗体的浓度。必须使用建议的抗体稀释度，以保证阳性结果。有关建议的稀释度范围请参考其他所需材料。

1) 将一抗浓度稀释到 1ng 至 0.2 μg/mL（以 1 μg/mL 储存液稀释 1:5,000 至 1:100,000 倍）

2) 将二抗浓度稀释到 2ng 至 10 ng/mL（以 1 μg/mL 储存液稀释 1:100,000 至 1:500,000 倍）

3) 将两种底物组份按 1:1 比例混合，制备底物工作液。注：暴漏于日光或任何其他强光可能损害工作液，为获得最佳结果，将此工作液保存在琥珀色瓶中， 并避免长期暴漏于任何强光。短时间暴漏于实验室常规照明不会损害该工作液。

4) 将印迹膜在 West Femto ECL 底物工作液中孵育 5 分钟。

5) 吸出多余试剂。用清洁的塑料膜盖住该印迹膜。

6) 使印迹膜在 X 光胶片上曝光

蛋白印迹法详细操作步骤

1) 将印记膜从蛋白转印设备中取出，加入合适的封闭液在温室下孵育 20-60 分钟，同时振荡。以 封闭膜上非特异性蛋白结合位点。 请注意：使用在前文建议的抗体稀释度是非常重要的。

2) 将膜从封闭液中取出，与一抗工作液在温室孵育 1 小时，同时振荡；或在 28℃孵育过夜，不振荡。

3) 将足量的洗涤缓冲液加至膜上，保证缓冲液将膜wan全覆盖。振荡孵育≥5 分钟，更换洗涤缓冲液 并重复该步骤 4-6 次。增加洗涤缓冲液体积，洗涤次数和洗涤时间有助于降低背景信号。

注：孵育前，膜在洗涤缓冲液中的短暂淋洗会提高洗涤效率。 请注意：使用在前文建议的 HRP 标记二抗稀释度是非常重要的。

4) 将 HRP 标记的二抗工作液与膜在温室孵育 1 小时，同时振荡。

5) 重复步骤 3，以除去未结合的 HRP 标记二抗。

注：膜与 HRP 标记二抗孵育后必须进行che底洗涤。

6) 将 A 溶液与 B 液等比例混合，制备成工作液。每 cm2膜使用 0.01～0.1ml 工作液。工作液可以 在温室下稳定 8 小时。

注：暴漏雨日光或任何其他强光下可能损害工作液，为获得嘴角结果，将此工作液保存在琥珀色瓶中，并避免长期暴漏雨任何强光。实验室的常见照明不会损害工作液。

7) 将印记膜在工作液中孵育 5 分钟。

8) 从工作液中取出印记膜，并置于一个塑料片或清洁的塑料纸（膜）中，用一张吸水纸吸除多余的液体，并从印记和塑料纸之间小心地压出气泡。

9) 将包在塑料纸（膜）中的印记膜置于胶片暗盒中，蛋白质面朝上，除适用于胶片曝光的灯（如红色安全灯）之外，关闭所有的灯。注意：胶片必须在曝光期间保持干燥，为获得最佳效果，采取以下措施：

* 确保将多余的底物从膜和塑料纸上wan全去除。

* 在整个胶片处理期间，使用手套。

* 切莫将印记膜置于已显影的胶片上，因为胶片上的化学物质会减弱信号。

10) 将 X 光胶片置于膜的上面。建议第一次曝光 60 秒。之后可调整曝光时间以达到最佳结果。化学发光反应在底物孵育后的前 5-30 分钟期间是zui强烈的。这一反应可以持续几个小时，但强度会随时间下降，如有底物孵育后较长时间后曝光，曝光时间可能需要延长以获得较强信号。如果使用 磷光存储成像设备（如 Bio-Rad 的分子成像仪系统）或 CCD 照相机可能需要较长的曝光时间。

注意：胶片与膜之间的任何移动可能在胶片上造成人为的非特异信号。

11) 使用合适的显影剂和定影剂对胶片进行显影。如果信号太强，则缩短曝光时间或将印记膜进行剥离并降低抗体浓度重新检测。

West Femto ECL超敏发光液 显色与信号检测

产品订购信息：

NobleRyder PE8818 West Femto ECL超敏发光液,West Femto ECL Substrate 2*12.5ml / 2*50ml