尿苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶（UDP-glucose pyrophosphosphprylase，UGP）试剂盒说明书

分光光度法 50 管/48 样

正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定

测定意义：

UDPG 焦磷酸化酶是生物体糖原合成过程中的关键酶。在葡萄糖合成糖原前催化葡萄糖活化，将 1-磷酸葡萄糖与UTP 分子合成为UDP-葡萄糖（UDPG）。

测定原理：

UGP 可逆催化反应生成 1 磷酸葡萄糖，在磷酸葡萄糖变位酶和 6-磷酸葡萄糖脱氢酶作用下将 NADP转化为NADPH，340nm 的吸光值增加速率反映了UGP 活性。

尿苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶试剂盒 糖原

组成：

试剂二：粉剂×1 瓶，-20℃避光保存。临用前加 5mL 蒸馏水充分溶解；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。

试剂三：粉剂×1 瓶，-20℃避光保存。临用前加 5 mL 蒸馏水充分溶解；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。

试剂四：粉剂×1 瓶，-20℃避光保存。临用前加 5 mL 蒸馏水充分溶解；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。

具体产品的参数以收到产品说明书的参数为准

自备仪器和用品：

天平、低温离心机、研钵、紫外分光光度计、1 ml 石英比色皿。

酶液提取：

1. 组织：按照质量（g）：提取液体积(ml)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g，加入 1ml 提取液）加入提取液，冰浴匀浆后于 4℃，10000g 离心 10min，取上清置冰上待测。

2. 细胞：按照细胞数量（10⁴ 个）：提取液体积（ml）为 500~1000：1 的比例（建议 500 万细胞加入 1ml提取液），冰浴超声波破碎细胞（功率 300w，超声 3 秒，间隔 7 秒，总时间 3min）；然后 4℃，10000g离心 10min，取上清置冰上待测。

3. 液体：直接检测。

测定操作：

1. 分光光度计预热 30min，调节波长至 340nm，蒸馏水调零。

2. 取 1ml 石英比色皿，依次加入 500μl 试剂一，100μl 试剂二，100μl 试剂三，100μl 试剂四，100μl 试剂五，100μl 粗酶液，充分混匀，记录 340nm 处 30s 的吸光值A1 和 330s 的吸光值A2，△A=A2-A1

计算公式：

（1） 按照样本蛋白浓度计算

酶活单位定义：每毫克组织蛋白每分钟消耗 1 nmol 的NADP 定义为一个酶活力单位。

UGP（nmol/min /mg prot）＝[ΔA÷（ε×d）×V 反总×10⁹]÷(V 样×Cpr) ÷T=321.54×ΔA÷Cpr

（2） 按照样本质量计算

酶活单位定义：每克组织每分钟消耗 1 nmol 的NADP 定义为一个酶活力单位。

UGP（nmol/min /g 鲜重）＝[ΔA÷（ε×d）×V 反总×10⁹]÷(W ×V 样÷V 样总) ÷T=321.54×ΔA÷W

（3） 按照细胞数量计算

酶活单位定义：每 10⁴ 个细胞每分钟消耗 1 nmol 的NADP 定义为一个酶活力单位。

UGP（nmol/min /10⁴ cell）= [ΔA÷（ε×d）×V 反总×10⁹]÷(500×V 样÷V 样总) ÷T

=0.643×ΔA

（4） 按照液体体积计算

酶活单位定义：每毫升液体每分钟消耗 1 nmol 的NADP 定义为一个酶活力单位。

UGP（nmol/min/ml）＝[ΔA÷（ε×d）×V 反总×10⁹]÷V 样÷T=321.54×ΔA

V 反总：反应体系总体积，1×10^-3 L；ε：NADPH 摩尔消光系数，6.22×10³ L / mol /cm；d：比色皿光径， 1cm；V 样：加入样本体积，0.1ml；V 样总：加入提取液体积，1ml；T：反应时间，5 min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/ml；W：样本质量，g ；500：细胞或细菌总数，500 万。

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