丙酮酸脱羧酶（pyruvate decarboxylase,PDC）活性测定试剂盒说明书

分光光度法 50 管/48 样

正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定测定意义：

PDC 主要存在于酵母中，是乙醇发酵的关键酶之一，催化丙酮酸脱羧生成乙醛。

测定原理：

PDC 催化丙酮酸脱羧生成乙醛，添加乙醇脱氢酶（ADH）来进一步催化 NADH 还原乙醛生成乙醇和NAD⁺；NADH 在 340 nm 有吸收峰，而 NAD⁺没有；通过测定 340 nm 光吸收下降速率，来计算 PDC 活性。

丙酮酸脱羧酶活性测定试剂盒 脂肪酸系列

组成：

混合试剂：临用前配制，将试剂四和试剂五转移至试剂三中充分溶解待用，用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。

具体产品的参数以收到产品说明书的参数为准

自备仪器和用品：

研钵、冰、台式离心机、紫外分光光度计、1ml 石英比色皿、可调式移液枪和蒸馏水。

粗酶液提取：

1、细菌或细胞处理：收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照每 200 万细菌或细胞加入 400μl试剂一，超声波破碎细菌或细胞（功率 200W，工作 3s，间歇 10s，工作 35 次），16000g 4℃离心 20min，取上清，置冰上待测。

2、组织处理：按照组织质量（g）：试剂一体积(ml)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1ml试剂一）进行冰浴匀浆，16000g 4℃离心 20min，取上清，置冰上待测。 3、血清（浆）等液体样品：直接检测。

PDC 测定操作：

1. 分光光度计预热 30min，调节波长到 340 nm，蒸馏水调零。

2. 试剂二置于 25℃水浴中预热 30 min。

3. 空白管：依次在 1ml 石英比色皿中加入 100μl 蒸馏水、100μl 混合试剂、700μl 试剂二和 100μl 试剂六，迅速混匀后于 340nm 比色，记录 15s 和 75s 的吸光值，分别记为 A1 和A2。

4. 测定管：依次在 1ml 石英比色皿中加入 100μl 上清液、100μl 混合试剂、700μl 试剂二和 100μl 试剂六，迅速混匀后于 340nm 比色，记录 15s 和 75s 的吸光值，分别记为 A3 和A4。

注意：空白管只需测定一次。

PDC 活性计算公式：

（1） 按照蛋白浓度计算

活性单位定义：25℃中，每毫克蛋白每分钟催化 1nmol NADH 氧化为 1 个酶活单位。

PDC (nmol/min/mg prot) ={[(A3－A4)－(A1-A2)]÷ε÷d×V 总×10⁹}÷(Cpr×V 样) ÷T

=1608×[(A3－A4)－(A1-A2)]÷Cpr

（2） 按照样本质量计算

活性单位定义：25℃中，每克组织每分钟催化 1nmol NADH 氧化为 1 个酶活单位。

PDC (nmol/min /g 鲜重) ={[(A3－A4)－(A1-A2)]÷ε÷d×V 总×10⁹}÷(W×V 样÷V 样总) ÷T

=1608×[(A3－A4)－(A1-A2)]÷W

（3） 按细胞数量计算

活性单位定义：25℃中，每 10⁴ 个细胞每分钟催化 1nmol NADH 氧化为 1 个酶活单位。

PDC (nmol/min/10⁴cell) ={[(A3－A4)－(A1-A2)]÷ε÷d×V 总×10⁹}÷(细胞数量×V 样÷V 样总) ÷T

=1608×[(A3－A4)－(A1-A2)]÷细胞数量

（4） 按血清（浆）体积计算

活性单位定义：25℃中，每毫升血清（浆）每分钟催化 1nmol NADH 氧化为 1 个酶活单位。PDC (nmol/min

/ml) ={[(A3－A4)－(A1-A2)]÷ε÷d×V 总×10⁹}÷V 样÷T

=1608×[(A3－A4)－(A1-A2)]

ε：NADH 摩尔消光系数，6.22×10³L/mol/cm；d：比色皿光径，1cm；V 总：反应体系总体积，1ml=0.001 L， V 样：加入反应体系中上清液体积，0.1ml；Cpr：蛋白浓度（mg/ml），需要另外测定，建议使用本公司 BCA 蛋白质含量试剂盒；W：样本质量，g ；V 样总：加入提取液体积，1ml；T：反应时间，1 min。

丙酮酸脱羧酶活性测定试剂盒 脂肪酸系列