漆酶（Laccase）试剂盒说明书

分光光度法 50 管/24 样

正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定测定意义：

漆酶（CE1.10.3.2）是一种含铜的多酚氧化酶，属于铜蓝氧化酶家族，广泛分布于真菌和高等植物中，

具有较强的氧化还原能力，在纸浆生物漂白，环境污染物降解和木质纤维素降解以及生物检测方面有非常广泛的应用。

测定原理：

漆酶分解底物ABTS 产生ABTS 自由基，在 420nm 处的吸光系数远大于底物ABTS，测定 ABTS 自由基的增加速率，可计算得漆酶活性。

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组成：

工作液：粉剂×1 瓶，4℃避光保存，临用前加 25ml 试剂一溶解；用不完的试剂 4℃保存一周。

具体产品的参数以收到产品说明书的参数为准

需自备仪器和用品：

天平、低温离心机、可见分光光度计、1 ml 玻璃比色皿、恒温水浴锅。

酶液提取：

1、组织：按照组织质量（g）：提取液体积(ml)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1ml

提取液），进行冰浴匀浆。12000g 4℃离心 30min，取上清，置冰上待测。

2、细胞：按照细胞数量（104 个）：提取液体积（ml）为 500~1000：1 的比例（建议 500 万细胞加入

1ml 提取液），冰浴超声波破碎细胞（功率 300w，超声 3 秒，间隔 7 秒，总时间 3min）；然后 4℃，10000g

离心 10min，取上清置于冰上待测。

3、培养液：直接检测。

测定步骤：

60℃水浴 20min 后冷却至室温，取上清液测定 420nm 处吸光值A，△A=A 测定管-A 对照管。

注意事项

1、极少数样本在 60℃水浴 20min 后会出现沉淀，可经过 8000g 25℃离心 10min 后，取上清检测，例如成熟的水稻叶片样本。

2、为确保检测准确性，若ΔA 大于 2，将样本用提取液稀释 2~10 倍后重新检测，计算公式乘以相应稀释倍数。

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