土壤中性磷酸酶（soil neutral phosphatase，S-NP）活性测定试剂盒说明书

分光光度法 50 管/48 样

正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定测定意义：

土壤磷酸酶是催化土壤有机磷矿化的酶，其活性的高低直接影响着土壤中有机磷的分解转化及其生物有效性，是评价土壤磷素生物转化方向与强度的指标。磷酸酶活性受到土壤碳、氮含量、有效磷含量和 pH的显著影响，根据最适PH 范围，一般把土壤磷酸酶分为中性、酸性和碱性三种类型。

测定原理：

中性环境中，S-NP 催化磷酸苯er钠水解生成ben酚和磷酸氢er钠，通过测定酚的生成量即可计算出NP活性。

土壤中性磷酸酶活性测定试剂盒-常备现货

试剂组成和配制：

试剂二：粉剂×1 瓶，4℃保存。用前加 50ml 蒸馏水充分溶解。

试剂四：粉剂×1 瓶，4℃避光保存。临用前加 1152μl 无水乙醇（自备），48 μl 蒸馏水充分溶解。（变褐色后不能再使用）。

标准品：液体×1 瓶，0.5 μmol/ml 酚标准液，4℃保存。

具体产品的参数以收到产品说明书的参数为准

自备仪器和用品：

可见分光光度计、台式离心机、37℃恒温培养箱、分析天平、可调式移液器、1ml 玻璃比色皿、冰、蒸馏水、乙醇和甲苯。

催化反应：

称取风干混匀土壤约 0.1g，加入 50μl 甲苯（自备），轻摇 15min；加 400μl 试剂一并且摇匀后，置于37℃恒温培养箱，开始计时，催化反应 24h；到时后迅速加入 1ml 试剂二充分混匀，以终止酶催化的反应。8000g，25℃离心 10min，取上清液置于冰上待测。

显色反应：

1. 分光光度计预热 30 min，调节波长到 660 nm，蒸馏水调零。

2. 空白管：取 1ml 玻璃比色皿，加入 50 μl 蒸馏水，100 μl 试剂三，20 μl 试剂四，充分混匀，显色后再加蒸馏水 830 μl，混匀后 25℃静置 30 min，于 660 nm 测定吸光度，记为A 空白管。

3. 标准管：取 1ml 玻璃比色皿，加入 50 μl 标准液，100 μl 试剂三，20 μl 试剂四，充分混匀，显色后再加蒸馏水 830 μl，混匀后 25℃静置 30 min，于 660 nm 测定吸光度，记为A 标准管。

4. 测定管：取 1ml 玻璃比色皿，加入 50 μl 上清液，100 μl 试剂三，20 μl 试剂四，充分混匀，显色后再加蒸馏水 830 μl，混匀后 25℃静置 30 min，于 660 nm 测定吸光度，记为A 测定管。

注意事项：

空白管和标准管只需测定一次。

S-NP 活性计算：

活性单位定义：37℃中每克土壤每天释放 1nmol 酚为 1 个酶活单位。

S-NP（μmol/d/g 土样）=[C 标准液×(A 测定管－A 空白管)÷(A 标准管－A 空白管)]×V 总÷W÷T

= 0.725×(A 测定管－A 空白管)÷(A 标准管－A 空白管)÷W

C 标准液：0.5μmol/ml；V 总：催化体系总体积，1.45ml；W：土壤样品质量，g；T：催化反应时间，24 h=1 d。

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