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DNA Quick Ligation Kit
DNA Quick Ligation Kit T4原理载体及其他
目录号：42110
目录编号 | 包装单位 |
42110-20 | 20次 |
42110-60 | 60次 |
Components | 42110-20 | 42110-60 |
2 xQuick Ligation Buffer | 100 ml | 300 ml |
T4 DNA ligase, 5 U/ml | 100 U | 300 U |
产品储存：-20°C 保存，避免反复冻融次数过多。
具体产品的参数以收到产品说明书的参数为准
制品说明：本试剂盒可在室温(22°C) 10分钟条件下，迅速完成DNA 片段粘端或平端连接反应。连接产物可直接转化。可用于DNA 片段克隆，文库构建，TA克隆，Linker连接等。
特点：快速、简单、粘端平端均可以在10分钟内完成连接反应。
操作步骤：
1. 反应按以下体系进行：
5 ml | 2 xQuick Ligation Buffer |
ml | Vector DNA(30-60ng） |
ml | Insert DNA（载体摩尔数量的3倍量，插入和载体摩尔比为3:1） |
ml | 无菌水 |
1 ml（5 Weiss Units/ml) | T4 DNA Ligase |
Final Volume | 10ml |
一般最后加入T4 DNA Ligase， 充分混匀，可瞬间离心收集液体至管底。
2. 22°C连接10分钟（一般可在PCR仪器完成）。
通常推荐22°C连接5-10分钟 ，>3kb长片段连接可以延长至30分钟。不推荐超过30分钟，超过可能降低转化子数量。
3. 冰上冷却，然后直接转化或贮存于-20°C
如储存于-20°C，转化前应该置冰上重新溶解，充分混匀后进行转化。
说明：
1. 转化前不要热灭活T4 DNA ligase，否则将降低转化效率。
2. DNA片段体积大于4 ml的，可增加2 xQuick Ligation Buffer，总反应体积相应可以增至20 ml，这样在连接体系中可加入更大体积的DNA片段。
DNA Quick Ligation Kit T4原理载体及其他
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