裂解液 PL、结合液 PQ 或者抑制物去除液 IR 低温时可能出现析出和沉淀，可以在 55℃水浴几分钟帮助重新溶解，恢复澄清透明后冷却到室温即可使用。
CTAB植物基因组DNA快速ti取试剂盒 核酸提取

诺博莱德 CTAB植物基因组DNA快速提取试剂盒（离心柱型）

CTAB植物基因组DNA快速ti取试剂盒 核酸提取

目录号：40114

适用范围：

适用于快速提取植物基因组DNA

试剂盒组成、储存、稳定性：

本试剂盒在室温储存 12 个月不影响使用效果。

储存事项:

1. 裂解液 PL、结合液 PQ 或者抑制物去除液 IR 低温时可能出现析出和沉淀，可以在 55℃水浴几分钟帮助重新溶解，恢复澄清透明后冷却到室温即可使用。

2.避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、pH 值变化，各溶液使用后应及时盖紧盖子。

具体产品的参数以收到产品说明书的参数为准

产品介绍：

改进的经典 CTAB 植物 DNA 抽提液内（添加多种针对植物特点的多糖、多fen去除成份）迅速裂解细胞和灭活细胞内核酸mei，lv仿抽提后通过离心清除多糖、多酚和蛋白质（根据需要，上清中还加入异丙chun离心沉淀基因组 DNA，进一步去除其它各种杂质），然后基因组 DNA 在高离序盐状态下选择性吸附于离心柱内硅基质膜，再通过一系列快速的漂洗－离心的步骤， 进一步将多糖、多fen和细胞代谢物、蛋白等杂质去除，zui后低盐的洗脱缓冲液将纯净基因组 DNA 从硅基质膜上洗脱。

产品特点：

 1.离心吸附柱内硅基质膜全部采用进口特制吸附膜，柱与柱之间吸附量差异极小，可重复性好。克服了国产试剂盒膜质量不稳定的弊端。

 2.不需要使用有毒的苯fen等试剂，也不需要乙chun沉淀等步骤。快速，简捷，单个样品操作一般可在 1 小时内完成。

 3.数种去多糖、多fen成份和多次柱漂洗确保高纯度，OD260/OD280 典型的比值达

 4.1.7～1.9，长度可达 30 kb -50kb，可直接用于 PCR，Southern-blot 和各种mei切反应

注意事项：

 1.所有的离心步骤均在室温完成，使用转速可以达到13,000rpm的传统台式离心机，如Eppendorf 5415C 或者类似离心机。

 2.开始实验前将需要的水浴先预热到65℃备用。

 3.需要自备lv仿/异戊chun（体积比24：1混合）、无水乙chun和β-巯基乙chun。

 4.结合液PQ 和抑制物去除液IR中含有刺激性化合物，操作时要戴乳胶手套，避免沾染皮肤、眼睛和衣服。若沾染皮肤、眼睛时，要用大量清水或者生理盐水冲洗。

 5.不同来源的植物组织材料中提取DNA 的量会有差异，一般100mg新鲜组织典型产量可达3-25μg。洗脱液EB不含有螯合剂EDTA， 不影响下游mei切、连接等反应。也可以使用水洗脱， 但应该确保pH大于7.5， pH过低影响洗脱效率。用水洗脱DNA应该保存在－20℃。DNA如果需要长期保存，可以用TE缓冲液洗脱 （10mM Tris-HCl， 1mM EDTA，pH 8.0），但是EDTA可能影响下游mei切反应，使用时可以适当稀释。        

 标准操作步骤：（实验前请先阅读注意事项）提示：

  第一次使用前请先在漂洗液 WB 和结合液 PQ 中加入zhi定量的无水乙chun，充分混匀，加入后请及时在方框打钩标记已加入乙chun，以免多次加入!

 取所需适量裂解液 PL 放置在 65℃预热，使用前加入 β-巯基乙chun到终浓度 2%。

 1.取适量植物组织（新鲜组织 100 mg 或干重组织 30 mg）在研钵中加入液氮充分碾磨成细粉。

 2.转移细粉到一个 1.5ml 离心管，不要解冻，加 600μl 65℃预热的裂解液 PL (确认已加入 β-巯基乙chun至 2%)，剧烈涡旋振荡混匀，用大口径枪头轻柔吹打帮助裂解。

（如果组织裂解困难，可根据需要加一个轻柔匀浆 10 秒的步骤帮助裂解。）

 3.65℃水浴 20-60 分钟，在水浴过程中颠倒离心管以混合样品数次。

（可选:如果组织干燥或者产量低，可以适当延长水浴时间。如果 RNA 残留多，可在水浴前加入 6μl RNA mei（20mg/ml）。）

 4.加入 700μl lv仿/异戊chun（体积比 24：1 混合），颠倒充分混匀几分钟（或者涡旋混匀），13,000rpm 离心 5 分钟。

（若提取的植物组织富含多糖多fen，可以在第4步前用等体积fen/lv仿（1：1）抽提一遍。）

 5.小心吸取上清到一个新的1.5ml离心管，注意不要吸到界面物质。

（如上清比较浑浊，则需要重复步骤4一遍，直到得到透亮上清。）

 6.较精确估算上清量，加入1.5 倍体积结合液PQ（请先检查是否已加入无水乙chun!）后立刻涡旋，充分混匀。此时可能出现沉淀，但不影响实验结果。

 7.将上一步所得混合物（包括可能出现的沉淀）加入一个DNA吸附柱中，（吸附柱放入收集管中）13,000rpm离心30秒，倒掉收集管中的废液（先加700μl离心，弃废液，再加入剩余的溶液，再次离心）。

 8.加入500μl 抑制物去除液IR，12,000rpm 离心30秒，弃废液。

 9.加入700μl漂洗液WB（请先检查是否已加入无水乙chun!），12,000rpm离心30秒，弃掉废液。

 10.加入 500μl 漂洗液 WB，12,000rpm 离心 30 秒，弃掉废液。

 11.将 DNA 吸附柱放回空收集管中，13,000rpm 离心 2 分钟，尽量除去漂洗液， 以免漂洗液中残留乙chun抑制下游反应。

 12.取出 DNA 吸附柱，放入一个干净的离心管中，在吸附膜的中央加100μl 洗脱缓冲液EB（洗脱缓冲液事先在 65-70℃水浴中预热），室温放置 3-5 分钟，12,000rpm离心1分钟。将得到的溶液重新加入离心吸附柱中，室温放置2分钟，12,000rpm离心 1 分钟。

（洗脱体积越大，洗脱效率越高，如果预计和需要产量高，可增大洗脱体积，如果需要 DNA 浓度较高，可以适当减少洗脱体积，但是zui小体积不应少于 50μl，体积过小降低 DNA 洗脱效率，减少DNA产量。）

 13.DNA可以存放在 2-8℃，如果要长时间存放，可以放置在－20℃。

附录（低DNA含量或者产量低样品操作步骤）：

 1.取适量植物组织（新鲜组织 400 mg 或干重组织 200 mg）在研钵中加入液氮充分碾磨成细粉。

 2.转移细粉到一个 15ml 离心管，不要解冻，加入 9ml 65℃预热的裂解液 PL (确认已经加入 β-巯基乙chun至 2%)，剧烈涡旋振荡混匀，用大口径枪头吹打帮助裂解。

（如果组织裂解困难，可根据需要加一个轻柔匀浆 10 秒的步骤帮助裂解。）

 3.室温放置 60 分钟，中间不时颠倒离心管以混合样品数次。

（如果组织干燥或者产量低，可以放置在 65℃水浴。）

 4.加 4.5ml lv仿/异戊chun（体积比 24：1 混合），涡旋充分混匀，3,000g 离心 10 分钟。

 5.小心吸取上清到一个新的 15ml 离心管，注意不要吸到界面物质。重复一遍步骤 4。

 6.小心吸取上清到一个新的 15ml 离心管，估算上清量，加入 0.7 倍体积的异丙chun，涡旋混匀来沉淀

CTAB植物基因组DNA快速ti取试剂盒 核酸提取