乳酸含量（lactic acid，LA）试剂盒说明书

分光光度法 50 管/24 样

正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定测定意义：

乳酸是生物体代谢过程中重要的中间产物，与糖代谢、脂类代谢、蛋白质代谢及细胞内能量代谢密切相关，乳酸含量是评估糖元代谢的和有氧代谢的重要指标。

测定原理：

乳酸在乳酸脱氢酶的作用下生成丙酮酸，同时使 NAD⁺还原生成NADH 和H⁺，H⁺传递给PMS 生成的PMSH2 还原INT 生成红色物质，在 530nm 处有特征吸收峰。

乳酸含量试剂盒   三羧酸循环系列-常备现货

组成：

试剂三：粉剂×1 支，-20℃避光保存。临用前加入 1.5ml 蒸馏水充分溶解。试剂四：粉剂×1 瓶，4℃避光保存。临用前加 15ml 蒸馏水充分溶解。

显色液：临用前根据用量按照提取液（V）：试剂三（V）：试剂四（V）：试剂五（m）=1（ml)：0.3（ml)：3（ml)：15（mg）的比例充分混匀。（注意：现配现用，用多少配多少，在棕色瓶中配制，试剂盒中带有5 个棕色空瓶）

具体产品的参数以收到产品说明书的参数为准

自备仪器和用品：

天平、研钵、离心机、可见分光光度计、1 ml 玻璃比色皿、恒温水浴锅。

样本处理：

1. 组织：按照质量（g）：提取液体积(ml)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g，加入 1ml 提取液）加入提取液，冰浴匀浆后于 4℃，12000g 离心 10min，取上清测定。

2. 细胞：按照细胞数量（10⁴ 个）：提取液体积（ml）为 500~1000：1 的比例（建议 500 万细胞加入 1ml提取液），冰浴超声波破碎细胞（功率 300w，超声 3 秒，间隔 7 秒，总时间 3min）；于 4℃，12000g离心 10min，取上清测定。

3. 血清：直接测定。

注意：标准对照管和标准测定管只需测定一次，每个样品测定管设一个样品对照管

计算公式：

1. 按照蛋白含量计算

LA 含量（μmol/mg prot）=△A 样÷△A 标×C 标÷ Cpr

=2×△A 样÷△A 标÷ Cpr

2. 按照样本质量计算

LA 含量（μmol/g 鲜重）=△A 样÷△A 标×C 标÷ W

=2×△A 样÷△A 标÷ W

3. 按照细胞数量计算

LA 含量（μmol/10⁴ cell）=△A 样÷△A 标×C 标÷ 细胞数量

=2×△A 样÷△A 标÷ 细胞数量

4. 按照液体体积计算

LA 含量（μmol/ml）=△A 样÷△A标×C 标

=2×△A 样÷△A 标

C 标：标准品浓度，2mmol/L ；W：样本质量，g/ml；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/ml

注意事项：

1. 若吸光值超过 2，请进行适当的稀释后再进行测定，并在计算公式中乘以稀释倍数。

2. zui低检出限为 1.8μmol/L。

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