谷an酰胺合成酶（Glutamine synthetase，GS）试剂盒说明书

微量法 100 管/48 样

正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定测定意义：

GS（EC 6.3.1.2）主要存在于植物中，是生物体内氨同化的关键酶之一，催化铵离子和谷an酸合成谷an酰胺，不仅可以防止过多的铵离子对生物有毒性，而且谷an酰胺也是氨的主要储存和运输形式。

测定原理：

GS 在ATP 和Mg²⁺存在下，催化铵离子和谷an酸合成谷an酰胺；谷an酰胺进一步转化为γ─谷an酰基异羟肟酸，在酸性条件下形成的络合物在 540nm 处有最大吸收峰，可用分光光度计测定。

谷氨酰an合成酶试剂盒 氨基酸系列-常备现货

组成：

试剂一临用前 37℃预热 20min，充分混匀，如有沉淀，静置 10min，取上清待用。试剂二临用前 37℃预热 20min，充分混匀，如有沉淀，静置 10min，取上清待用。试剂三用时每瓶加入 5ml 蒸馏水充分溶解待用。

具体产品的参数以收到产品说明书的参数为准

自备仪器和用品：

可见分光光度计/酶标仪、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96 孔板、研钵、冰和蒸馏水。

样本测定的准备：

1、细菌、细胞或组织样品的制备：

细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（104 个）：提取液体积（ml）为 500~1000：1 的比例（建议 500 万细菌或细胞加入 1ml 提取液），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率 20％或 200W，超声 3s，间隔 10s，重复 30 次）；8000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。

组织：按照组织质量（g）：提取液体积(ml)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1ml 提取液），进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。

2、血清（浆）样品：直接检测。

测定步骤：

1、分光光度计预热 30min 以上，调节波长至 540nm，蒸馏水调零。

2、在EP 管中加入下列试剂：

混匀，37℃（哺乳动物）或 25℃（其他物种）准确水浴 30min

混匀，25℃室温静置 10min 后，8000g，25℃离心 10min，取 200μl 上清液至微量石英比色皿或 96 孔板中，测定 540nm 处的吸光值 A。△A=A 测定管-A 对照管。每个测定管需设一个对照管。

GS 活力单位的计算：

a. 用微量石英比色皿测定的计算公式如下

标准曲线：y = 0.8348x + 0.0008，R² = 0.9999

1、血清（浆）GS 活性

单位定义：每 ml 血清（浆）在每 ml 反应体系中每小时产生 1μmol γ-谷氨酰基异羟肟酸定义为一个酶活力单位。

计算公式：

GS（μmol/h/ml）=(ΔA-0.0008)÷0.8348×V 反总÷V 样÷T

=10.268×ΔA

2、组织、细菌或细胞 GS 活性

（1） 按样本蛋白浓度计算：

‍

单位的定义：每mg 组织蛋白在每ml 反应体系中每小时产生 1μmol γ-谷氨酰基异羟肟酸定义为一个酶活力单位。

GS（μmol/h/mg prot）=(ΔA-0.0008)÷0.8348×V 反总÷(Cpr×V 样)÷T

=10.268×ΔA÷Cpr

（2） 按样本鲜重计算：

单位的定义：每g 组织在每ml 反应体系中每小时产生 1μmol γ-谷氨酰基异羟肟酸定义为一个酶活力单位。

GS（μmol/h/g 鲜重）=(ΔA-0.0008)÷0.8348×V 反总÷(W× V 样÷V 样总)÷T

=10.268×ΔA÷W

（3） 按细菌或细胞密度计算

单位定义：每 1 万个细菌或细胞在每 ml 反应体系中每小时产生 1μmol γ-谷氨酰基异羟肟酸定义为一个酶活力单位。

GS（μmol/h//10⁴ cell）=(ΔA-0.0008)÷0.8348×V 反总÷(500×V 样÷V 样总)÷T

=0.021×ΔA

V 反总：反应体系总体积，0.3ml； V 样：加入样本体积，0.07ml；V 样总：加入提取液体积，1 ml； T：反应时间，30 min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/ml；W：样本质量，g；500：细菌或细胞总数，500 万。

b. 用 96 孔板测定的计算公式如下

标准曲线：y = 0.4174x + 0.0008，R² = 0.9999

1、血清（浆）GS 活性

单位定义：每 ml 血清（浆）在每 ml 反应体系中每小时产生 1μmol γ-谷氨酰基异羟肟酸定义为一个酶活力单位。

计算公式：

GS（μmol/h/ml）=(ΔA-0.0008)÷0.4174×V 反总÷V 样÷T

=20.535×ΔA

2、组织、细菌或细胞 GS 活性

（1） 按样本蛋白浓度计算：

单位的定义：每 mg 组织蛋白在每ml 反应体系中每小时产生 1μmol γ-谷氨酰基异羟肟酸定义为一个酶活力单位。

GS（μmol/h/mg prot）=(ΔA-0.0008)÷0.4174×V 反总÷(Cpr×V 样)÷T

=20.535×ΔA÷Cpr

（2） 按样本鲜重计算：

单位的定义：每 g 组织在每ml 反应体系中每小时产生 1μmol γ-谷氨酰基异羟肟酸定义为一个酶活力单位。

GS（μmol/h/g 鲜重）=(ΔA-0.0008)÷0.4174×V 反总÷(W× V 样÷V 样总)÷T

=20.535×ΔA÷W

（3） 按细菌或细胞密度计算

单位定义：每 1 万个细菌或细胞在每 ml 反应体系中每小时产生 1μmol γ-谷氨酰基异羟肟酸定义为一个酶活力单位。

GS（μmol/h/10⁴ cell）=(ΔA-0.0008)÷0.4174×V 反总÷(500×V 样÷V 样总)÷T

=0.041×ΔA

V 反总：反应体系总体积，0.3ml； V 样：加入样本体积，0.07ml；V 样总：加入提取液体积，1 ml； T：反应时间，30 min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/ml；W：样本质量，g；500：细菌或细胞总数，500 万。

谷氨酰an合成酶试剂盒 氨基酸系列-常备现货