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谷an酸合成酶（Glutamate synthase，GOGAT）试剂盒说明书
微量法 100 管/96 样
GOGAT 广泛分布于植物中，和谷an酰胺合成酶共同构成 GS/GOGAT 循环，参与氨同化的调控。
GOGAT 催化谷an酰胺的氨基转移到α-酮戊二酸，形成两分子的谷an酸；同时 NADH 氧化生成NAD+， 340nm 吸光度的下降速率可以反映 GOGAT 活性大小。
产品名称 | BG6002-100T/96S | Storage |
提取液：液体 | 100ml | 4℃ |
试剂一：液体 | 20ml | 4℃ |
试剂二：粉剂 | 2 瓶 | 4℃ |
说明书 | 一份 | |
具体产品的参数以收到产品说明书的参数为准
自备仪器和用品：
紫外分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、微量石英比色皿/96 孔板、研钵、冰和蒸馏水。
细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（104 个）：提取液体积（ml）为 500~1000：1 的比例（建议 500 万细菌或细胞加入 1ml 提取液），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率 20％或 200W，超声 3s，间隔 10s，重复 30 次）；8000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
组织：按照组织质量（g）：提取液体积(ml)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1ml 提取液），进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
1、分光光度计或酶标仪预热 30min 以上，调节波长至 340nm，蒸馏水调零。
2、样本测定
（1） 在试剂二中加入 9ml 试剂一充分溶解混匀，置于 37℃（哺乳动物）或 25℃（其它物种）水浴 5min；
现配现用（配好后 3h 内用完）；
（2） 在微量石英比色皿或 96 孔板中加入 20μl 样本和 180μl 试剂二，混匀，立即记录 340nm 处 20s 时的吸光值A1 和 5min20s 后的吸光值A2，计算ΔA=A1-A2。
a. 用微量石英比色皿测定的计算公式如下
（1） 按样本蛋白浓度计算：
单位的定义：每mg 组织蛋白每分钟消耗 1 nmol 的NADH 定义为一个酶活力单位。
GOGAT（nmol/min/mg prot）＝[ΔA×V 反总÷（ε×d）×109]÷(V 样×Cpr) ÷T=321×ΔA÷Cpr
（2） 按样本鲜重计算：
单位的定义：每g 组织每分钟消耗 1 nmol NADH 定义为一个酶活力单位。
GOGAT（nmol/min/g 鲜重）＝[ΔA×V 反总÷（ε×d）×109]÷(W ×V 样÷V 样总) ÷T=321×ΔA÷W
（3） 按细菌或细胞密度计算：
单位的定义：每 1 万个细菌或细胞每分钟消耗 1 nmol NADH 定义为一个酶活力单位。
GOGAT（nmol/min/104 cell）＝[ΔA×V 反总÷（ε×d）×109]÷(500×V 样÷V 样总) ÷T=0.642×ΔA
V 反总：反应体系总体积，2×10-4 L；ε：NADH 摩尔消光系数，6.22×103 L / mol /cm；d：比色皿光径，1cm； V 样：加入样本体积，0.02 ml；V 样总：加入提取液体积，1 ml；T：反应时间，5 min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/ml；W：样本质量，g；500：细菌或细胞总数，500 万。
1）按样本蛋白浓度计算：
单位的定义：每mg 组织蛋白每分钟消耗 1 nmol 的NADH 定义为一个酶活力单位。
GOGAT（nmol/min/mg prot）＝[ΔA×V 反总÷（ε×d）×109]÷(V 样×Cpr) ÷T=643×ΔA÷Cpr
（2） 按样本鲜重计算：
单位的定义：每g 组织每分钟消耗 1 nmol NADH 定义为一个酶活力单位。
GOGAT（nmol/min/g 鲜重）＝[ΔA×V 反总÷（ε×d）×109]÷(W× V 样÷V 样总) ÷T=643×ΔA÷W
（3） 按细菌或细胞密度计算：
单位的定义：每 1 万个细菌或细胞每分钟消耗 1 nmol NADH 定义为一个酶活力单位。
GOGAT（nmol/min/104 cell）＝[ΔA×V 反总÷（ε×d）×109]÷(500×V 样÷V 样总)÷T=1.286×ΔA
V 反总：反应体系总体积，2×10-4 L；ε：NADH 摩尔消光系数，6.22×103 L / mol /cm；d：96 孔板光径，0.5cm； V 样：加入样本体积，0.02 ml；V 样总：加入提取液体积，1 ml；T：反应时间，5 min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/ml；W：样本质量，g；500：细菌或细胞总数，500 万。
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