甲醛脱氢酶（Formaldehyde Dehydrogenase，FDH）试剂盒说明书

微量法 100T/96S

正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定测定意义：

甲醛是一种能与蛋白质、核酸和脂类产生非特异性反应的活泼化合物，对所有生物都具有很高毒性。甲醛脱氢酶作为含锌中等链醇脱氢酶（ADH）的家庭成员之一，广泛存在于原核和真核生物中，该酶能利用NAD⁺作为辅酶，将有毒的甲醛氧化，是甲醛氧化途径中的关键酶。

测定原理：

甲醛脱氢酶催化甲醛和 NAD⁺产生NADH，在 340nm 处的吸光值会增加，测定 340nm 处的吸光值变化，可计算得到甲醛脱氢酶的活性。

甲醛脱氢酶试剂盒   辅酶Ⅰ系列-常备现货

组成：

试剂二：粉剂×1 瓶，-20℃保存；临用前加入 6ml 水溶解待用，用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。

试剂三：粉剂×1 支，4℃保存；临用前加入 1.5ml 水溶解待用。

自备仪器和用品：

天平、离心机、酶标仪、96 孔板、蒸馏水。

FDH 提取：

1. 组织：按照组织质量（g）：提取液体积(ml)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1ml 提取液）进行冰浴匀浆，然后 10000g，4℃，离心 20min。

2. 细胞：按照细胞数量（10⁴ 个）：提取液体积（ml）为 500~1000：1 的比例（建议 500 万细胞加入 1ml提取液），冰浴超声波破碎细胞（功率 300w，超声 3 秒，间隔 7 秒，总时间 3min）；然后 10000g，4℃，离心 10min，取上清置于冰上待测。

3. 液体：直接检测。

测定操作表：

1、酶标仪预热 30min，调节波长至 340nm。

2、操作表

在 96 孔板中加入如下试剂

混匀，于 340nm 下测定初始吸光值A1 与 5min 后的吸光值A2，△A=A2-A1。若样本数量较多，可将试剂按比例配成工作液使用。

FDH 酶活计算：

（1） 按蛋白浓度计算

酶活定义：每毫克蛋白每分钟催化还原 1nmol NAD⁺的酶量为 1 个酶活单位。

FDH 酶活（nmol/min/mg prot）=

（2） 按样本质量计算

DA ×V 反总÷（V 样×Cpr）÷T = 643×△A÷Cpr e´ d

酶活定义：每克样品每分钟催化还原 1nmol NAD⁺的酶量为 1 个酶活单位。

FDH 酶活（nmol/min/g 鲜重）=

（3） 按照细胞数量计算

DA ×V 反总÷（V 样×W÷V 样总）÷T =643×△A÷W e´ d

酶活定义：每 10⁴ 个细胞每分钟催化还原 1nmol NAD⁺的酶量为 1 个酶活单位。

FDH 酶活（nmol/min/10⁴cell）=数量

（4） 按液体体积计算

DA ×V 反总÷（V 样÷V 样总×细胞数量（万个））÷T= 643×△A÷细胞 e´ d

酶活定义：每ml 样本每分钟催化还原 1nmol NAD⁺的酶量为 1 个酶活单位。

FDH 酶活（nmol/min/ml）=DA ×V 反总÷V 样÷T=643×△A e´ d

e：NADH 微摩尔消光系数，6.22×10^-3 L/µmol/cm；d：96 孔板光径，0.5cm；V 反总：反应体系总体积， 0.2ml；V 样：反应体系中样本体积，0.02ml；V 样总：加入提取液体积，1ml；T，反应时间，5min；Cpr：样本蛋白浓度，mg/ml；W：样本质量，g

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