酪an酸解氨酶（Tyrosine ammonilyase，TAL）试剂盒说明书

分光光度法 50 管/24 样

正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定测定意义：

TAL 广泛存在于植物和微生物中，是苯an氨酸代谢途径的关键酶之一。TAL 能够跃过肉桂酸-4-羟基化酶（C4H）直接将酪an酸转化为香豆酸，香豆酸可进一步生成白藜芦醇、柚皮素等具有抗氧化、抗衰老作用的苯丙素类天然产物。

测定原理：

TAL 能够分解酪an酸产生香豆酸，使反应溶液 333nm 下的吸光度随反应时间而上升，根据吸光度的变化率可计算出 TAL 活性。

酪an氨酸解氨酶试剂盒 抗氧系列-常备现货

组成：

试剂三：粉剂×1 瓶，4℃保存。临用前加 5ml 蒸馏水溶解；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。

自备仪器和用品：

紫外分光光度计、台式离心机、可调式移液器、1ml 石英比色皿、研钵、冰和蒸馏水

粗酶液提取：

1、细菌、细胞或组织样品的制备：

细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（10⁴ 个）：提取液体积（ml）为 500~1000：1 的比例（建议 500 万细菌或细胞加入 1ml 提取液），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率 20％或 200W，超声 3s，间隔 10s，重复 30 次）；8000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。

组织：按照组织质量（g）：提取液体积(ml)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1ml 提取液），进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。

2、血清（浆）果汁等液体样品：直接检测。

测定操作表：

1、分光光度计预热 30min 以上，调节波长至 333nm，蒸馏水调零。

2、试剂二的配置：临用前在试剂二瓶中加入 15ml 试剂一充分溶解待用（用不完的试剂 4℃保存一周，注意现配现用），在 37℃（哺乳动物）或 25℃（其它物种）水浴 10min 以上。

3、在EP 管中依次加入如下试剂

混匀，10000g4℃离心 5min，取 0.8~1ml 上清至 1ml 石英比色皿，333nm 下测定吸光值 A 测定与 A 对照，

ΔA=A 测定-A 对照

TAL 活性计算：

1、血清（浆）或果汁TAL 活性

单位的定义：每分钟每ml 血清（浆）或果汁在每ml 反应体系中使 333nm 处吸光值变化

0.01 为一个酶活力单位。

TAL（U/ml）=ΔA×V 反总÷( V 样÷V 样总)÷0.01÷T =17.5×ΔA

2、组织、细菌或细胞TAL 活性

（1） 按样本蛋白浓度计算：

单位定义：每分钟每mg 组织蛋白在每ml 反应体系中使 333nm 处吸光值变化 0.01 为一个酶活力单位。

TAL（U/mg prot）=ΔA×V 反总÷（V 样×Cpr）÷0.01÷T =17.5×ΔA÷Cpr

此法需要自行测定样本蛋白质浓度。

（2） 按样本鲜重计算：

单位定义：每分钟每g 组织在每ml 反应体系中使 333nm 处吸光值变化 0.01 为一个酶活力单位。

TAL（U/g 鲜重）=ΔA×V 反总÷(W× V 样÷V 样总)÷0.01÷T =17.5×ΔA÷W

（3） 按细菌或细胞密度计算：

单位定义：每分钟每 1 万个细菌或细胞在每ml 反应体系中使 333nm 处吸光值变化 0.01 为一个酶活力单位。

TAL（U/10⁴ cell）=ΔA×V 反总÷(500×V 样÷V 样总)÷0.01÷T =0.035×ΔA

V 反总：反应体系总体积，1.05ml；V 样：加入样本体积，0.1ml；V 样总：加入提取液体积，1 ml；T：反应时间，60 min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/ml；W：样本质量，g；500：细胞或细菌总数，500 万。

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