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过氧化氢酶试剂盒(钼酸铵比色法) 抗逆系列
简要描述:

CAT(EC 1.11.1.6)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中,是最主要的H2O2 清除酶,在活性氧清除系统中具有重要作用。
过氧化氢酶试剂盒(钼酸铵比色法) 抗逆系列

  • 产品型号:BA6010
  • 厂商性质:经销商
  • 更新时间:2025-04-03
  • 访  问  量:116
详情介绍


过氧化氢酶(CatalaseCAT)试剂盒(钼酸铵比色法)说明书

微量法 100 /96 

正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定测定意义:

CAT(EC 1.11.1.6)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中,是最主要的H2O2 清除酶,在活性氧清除系统中具有重要作用。

测定原理:

过氧化氢能氧化 MoO 2-MoO52-,MoO52-接受氢氧根的电子成键,分子间立即脱水缩合,得到稳定的黄色复合物(H2MoO4·XH2O)n  405nm 处有强烈吸收峰,其吸光值和过氧化氢浓度成线性关系。测定出体系剩余过氧化氢在 405nm 的吸光值即可反映 CAT 的催化活性。

过氧化氢酶试剂盒(钼酸铵比色法)  抗逆系列

组成:

产品名称

BA6010-100T/96S

Storage

提取液:酸性提取液

100ml

4℃

试剂一:液体

15ml

4℃避光

试剂二:液体

25ml

常温

试剂三:液体

60ml

4℃

说明书

一份

自备仪器和用品:

酶标仪、台式离心机、可调式移液器、96 孔板、研钵、冰和蒸馏水

粗酶液提取:

1、细菌、细胞或组织样品的制备:

细菌或培养细胞:先收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照细菌或细胞数量(104 个):提取液体积(ml) 500~1000:1 的比例(建议 500 万细菌或细胞加入 1ml 提取液),超声波破碎细菌或细胞(冰浴,功率 20%或 200W,超声 3s,间隔 10s,重复 30 次);8000g 4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。

组织:按照组织质量(g):提取液体积(ml) 1:5~10 的比例(建议称取约 0.1g 组织,加入 1ml 提取液),进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。

2、血清(浆)样品:直接检测。

测定步骤:

1、酶标仪预热 30min 以上,调节波长至 405 nm

2、在EP 管中加入下列试剂

试剂名称(μl)

测定管

空白管

样本

10


试剂一

60


混匀,25℃准确反应 2 min

试剂二

200


试剂三

530

530

试剂二


200

提取液


10

试剂一


60

混匀,取 200μl  96 孔板立即测定A 空白和A 测定,ΔA=A 空白-A 测定。空白管只需做一管。

CAT 活性计算:

1、标准曲线:y = 0.09x + 0.0013 R2 = 1 x:体系中过氧化氢浓度变化值(μmol/ml)

y:吸光值差值ΔA

2、血清(浆)CAT 活力的计算:

单位的定义:每毫升血清(浆)每分钟催化 1μmol H2O降解定义为一个酶活力单位。

CAT(μmol /min/ml)= =(ΔA-0.0013)÷0.09×V 反总÷V ÷T=444.44×(ΔA-0.0013)

3、组织、细菌或细胞中 CAT 活力计算:

(1) 按样本蛋白浓度计算:

单位的定义:每mg 组织蛋白每分钟催化 1μmol H2O2 降解定义为一个酶活力单位。

CAT(μmol/min/mg prot)=(ΔA-0.0013)÷0.09×V 反总÷(V 样×Cpr) ÷T=444.44×(ΔA-0.0013)÷Cpr

(2) 按样本鲜重计算:

单位的定义:每g 组织每分钟催化 1μmol H2O2 降解定义为一个酶活力单位。

CAT(μmol/min/g 鲜重)=(ΔA-0.0013)÷0.09×V÷(W× V 样÷V 样总)÷T=444.44×(ΔA-0.0013)÷W

V 反总:反应体系总体积,0.8 ml;V 样:加入样本体积,0.01 ml;V 样总:加入提取液体积,1 ml;T:反应时间,2 min;W:样本质量,g;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/ml。

注意事项

1、预实验若发现酶活性过高(A 测定<0.1),可用提取液适当稀释样品后测定,并在计算公式中乘以相应稀释倍数。

2、若 A 空白<A 测定,一方面可能是酶活性过低,可将反应时间 2 延长到 5min,另一方面可能样本中杂质干扰严重,可将样本稀释 5 倍左右后测定,并在计算公式中代入实际反应时间和乘以相应稀释倍数。

过氧化氢酶试剂盒(钼酸铵比色法)  抗逆系列


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