诺博莱德 过氧化氢酶(CAT)活性检测试剂盒 Catalase(CAT) Activity Assay Kit
过氧化氢酶(CAT)活性检测试剂盒 抗逆系列
产品货号:BC8088
产品名称:过氧化氢酶(CAT)活性检测试剂盒 Catalase(CAT) Activity Assay Kit
产品规格:50T/48S
产品简介:
中文名称:过氧化氢酶(CAT)活性检测试剂盒
英文名称:Catalase(CAT) Activity Assay Kit
规格:50T/48S
检测方法:紫外分光光度法 Spectrophotometer
储存条件:Store at 2-8℃,1 year
具体产品的参数以收到产品说明书的参数为准
NobleRyder BC8088过氧化氢酶(CAT)活性检测试剂盒 Catalase(CAT) Activity Assay Kit
CAT(EC 1.11.1.6)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中,是最主要的H2O2清除酶,在活性氧清除系统中具有重要作用。
H2O2在240nm下有特征吸收峰,CAT能够分解H2O2,使反应溶液240nm下的吸光度随反应时间而下降,根据吸光度的变化率可计算出CAT活性。
需自备的仪器和用品:
紫外分光光度计、台式离心机、可调式移液器、1mL石英比色皿、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。
操作步骤:
一、样本处理(可适当调整待测样本量,具体比例可以参考文献)
1、细菌、细胞或组织样本的制备
a、细菌或培养细胞:收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清:按照细菌或细胞数量(104个):提取液
体积(mL)为500-1000:1的比例(建议500万细菌或细胞加入1mL提取液),超声波破碎细菌或细胞(功率200w,
超声3秒,间隔10秒,重复30次):8000g4℃离心10分钟,取上清,置冰上待测。
b、组织:按照组织质量(g):提取液体积(mL)为1:5-10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL提液),进行冰浴匀浆。8000g4℃离心10分钟,取上清,置冰上待测。
2、血清(浆)样本:直接检测。
二、测定步骤
1、分光光度计预热30min以上,调节波长至240nm处,蒸馏水调零。
2、测定前将CAT检测工作液37℃(哺乳动物)或25℃(其他物种)水浴10min。
3、取 1mLCAT检测工作液于1mL石英比色皿中,再加入35μL样本,混匀5s;室温下立即测定240nm 下的初始吸光值A1和1min后的吸光值A2。计算AA=A1-A2。
三、CAT 活性计算
1、血清(浆)CAT活力的计算:
单位的定义:每mL血清(浆)在反应体系中每分钟催化1μmolH2O2降解定义为一个酶活力单位。
CAT(U/mL) =[ΔAxV 反总+ (εxd) x10³]+V 样+T=678xΔA
2、组织、细菌或细胞中CAT活力计算:
(1)按样本蛋白浓度计算:
单位的定义:每mg组织蛋白在反应体系中每分钟催化1μmolH2O2降解定义为一个酶活力单位。
CAT(U/mg prot) =[4AxV 反总÷ (εxd) x106]÷ (V 样xCpr) +T=678xΔA+Cpr
(2)按样本质量计算:
单位的定义:每g组织在反应体系中每分钟催化1μmol H2O2降解定义为一个酶活力单位。
CAT(U/g质量)=[ΔAxV 反总÷(εxd) x106]÷ (WxV 样+V 样总)+T=678xΔA÷W
3、按细菌或细胞数量计算:
单位的定义:每1万个细菌或细胞在反应体系中每分钟催化1μmol H2O2降解定义为一个酶活力单位。
CAT (U/10* cell) =[ΔAxV 反总÷ (εxd) x106]÷ (500xV 样÷V 样总)+T=1.356xΔA
V反总:反应体系总体积,1.035x103L;ε:H2O2摩尔吸光系数,43.6 L/mol/cm:d:1mL石英比色皿光径,lcm;V样:加入样本体积,0.035mL;V样总:加入提取液体积,1mL;T:反应时间,1min:W:样本质量,g;Cpr:上清液蛋白浓度,mg/mL;500:细胞或细菌总数,500万;106:单位换算系数,1mol=106umol。
注意事项:
如果反应液有大量气泡产生,将样本用蒸馏水稀释后再进行测定。
过氧化氢酶(CAT)活性检测试剂盒 抗逆系列
产品订购信息:
BC8088过氧化氢酶(CAT)活性检测试剂盒 Catalase(CAT) Activity Assay Kit 50T/48S
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