诺博莱德 过氧化物酶(POD)活性检测试剂盒 Peroxidase(POD) Activity Assay Kit
过氧化物酶(POD)活性检测试剂盒 抗逆系列
产品货号:BC8878
产品名称:过氧化物酶(POD)活性检测试剂盒 Peroxidase(POD) Activity Assay Kit
产品规格:50T/48S
产品简介:
中文名称:过氧化物酶(POD)活性检测试剂盒
英文名称:Peroxidase(POD) Activity Assay Kit
规格:50T/48S
检测方法:可见分光光度法 Spectrophotometer
储存条件:Store at 2-8℃,6 months
具体产品的参数以收到产品说明书的参数为准
NobleRyder BC8878过氧化物酶(POD)活性检测试剂盒 Peroxidase(POD) Activity Assay Kit
POD(EC 1.11.1.7)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中,可催化过氧化氢氧化酚类和胺类化合物,具有消除过氧化氢和酚类、胺类毒性的双重作用。POD催化H2O2氧化特定底物,在470nm有特征光吸收。
需自备的仪器和用品:
可见分光光度计、台式离心机、可调式移液器、1mL玻璃比色皿、研钵/匀浆器/细胞超声破碎仪、冰和蒸馏水。
操作步骤:
一、样本处理(可适当调整待测样本量,具体比例可以参考文献)
1、细菌、细胞或组织样本的制备:
细菌或培养细胞:先收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清:按照细菌或细胞数量(104个):提取液体积(mL)为500~1000:1的比例(建议500万细菌或细胞加入1mL提取液),超声波破碎细菌或细胞(冰浴,功率200W,超声3s,间隔10s,重复30次);8000g4℃离心10min,取上清,置冰上待测。
组织:按照组织质量(g):提取液体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL提取液),进行冰浴匀浆。8000g4℃离心10min,取上清,置冰上待测。
2、血清(浆)样本:直接检测。
注:该试剂盒的样本匀浆上清也可用于BC0170/BC0175(超氧化物歧化酶)、BC5160/BC5165(超氧化物歧化酶)、BC0020/BC0025(丙二醛)、BC0200/BC0205(过氧化氢酶)、BC0680/BC0685(乳酸脱氢酶)的测定。
二、测定步骤
1、分光光度计预热30min以上,调节波长至470nm,蒸馏水调零。
2、测定前将试剂一、试剂二工作液和试剂三37℃(哺乳动物)或25℃(其它物种)放置10min。
在1mL玻璃比色皿中按顺序加入上述试剂,立即混匀并计时,记录470nm下30s时的吸光值A1和1min30s后的吸光值A2。计算△A=A2-A1.
三、POD 活性计算
1、血清(浆)POD活性
单位定义:每mL血清(浆)在每mL反应体系中每分钟A470nm变化0.01为一个酶活力单位。
POD (U/mL) =ΔAxV 反总+V 样+0.01+T-7133x△A
2、组织、细菌或细胞POD活性
(1)按样本蛋白浓度计算
单位定义:每mg组织蛋白在每mL反应体系中每分钟A470nm变化0.01为一个酶活力单位。
POD(U/mg prot)=ΔAxV 反总÷ (V样xCpr)+0.01+T=7133xΔA÷Cpr
(2)按样本质量计算
单位定义:每g组织在每mL反应体系中每分钟A470nm变化0.01为一个酶活力单位。
POD(U/g质量)=ΔAxV 反总+(WxV样+V 样总)+0.01+T =7133xΔA+W
(3)按细菌或细胞数量计算
单位定义:每1万个细菌或细胞在每mL反应体系中每分钟A470nm变化0.01为一个酶活力单位。
POD (U/104cell) =ΔAxV 反总+(500xV样+V样总)+0.01+T=14.27x△A
V反总:反应体系总体积,1.07mL:V样:加入样本体积,0.015mL:V样总:加入提取液体积,1mL:T:反应时间,1min:Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL:W:样本质量,g;500:细菌或细胞总数,500万。
注意事项:
1.若一次性测定样本较多,可将试剂一、试剂二工作液、试剂三和蒸馏水按比例配成混合液,在37℃(哺乳动物)或25℃(其它物种)放置10min以上,测定时加入15μL样本和1055μL混合液测定。
2.如果△A小于0.005,可将反应时间延长到5min。如果△A大于0.5或者反应液中有较多气泡产生,可将样本用提取液稀释后测定,计算公式中乘以相应稀释倍数。
过氧化物酶(POD)活性检测试剂盒 抗逆系列
产品订购信息:
BC8878过氧化物酶(POD)活性检测试剂盒 Peroxidase(POD) Activity Assay Kit 50T/48S
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