产品货号：M0239
产品名称：NHS磁珠 Magrose-NHS Magrose-NHS magnetic beads
英文名称：Magrose-NHS magnetic beads
产品规格：1ml/5ml
产品简介：
说明：20%(v/v)
NHS磁珠 辅助试剂-常备现货

诺博莱德 NHS磁珠 Magrose-NHS Magrose-NHS magnetic beads

NHS磁珠   辅助试剂-常备现货

产品货号：M0239

产品名称：NHS磁珠 Magrose-NHS Magrose-NHS magnetic beads

英文名称：Magrose-NHS magnetic beads

产品规格：1ml/5ml

产品简介：

说明：20%(v/v)

具体产品的参数以收到产品说明书的参数为准

NobleRyderM0239 NHS磁珠 Magrose-NHS Magrose-NHS magnetic beads表面为NHS 基团修饰，能够与带有伯胺基团的蛋白和其他分子形成稳定的肽键，用于亲和纯化抗体、抗原和其他生物分子。与传统的羧基、氨基磁珠相比，表面含 NHS 基团的磁珠无需事先采用EDC/NHS或戊二醛进行活化，只需简单地将含伯氨基的生物配体溶解在试剂盒自带的Coupling Buffer 中，室温下将蛋白与NHS 磁珠混合1~2h 便可将生物配体共价偶联到磁珠上，

具有操作简单、偶联条件温和、生物配体偶联快速高效等优点。磁珠偶联过程必需在不含任何氨基的缓冲溶剂中进行。人工操作时，使用磁性分离架实现磁珠与溶剂分离。也可采用自动化设备操作，自动化操作适合用于多样品的筛选。

蛋白偶联操作流程及优化点

1.蛋白溶液的配制

2.磁珠的洗涤

3.蛋白偶联：（优化）

(1) Coupling Buffer 的种类。首先通过实验确定最合适的CouplingBuffer

 (2) 确定合适的CouplingBuffer 后，再通过实验优化蛋白溶液的浓度

4.封闭

5.磁珠保存

6.注意事项：

(1) 其中磁珠洗涤要严格按照说明书采用冷却的WashingBufferA快速洗涤，以防磁珠在洗涤过程中NHS基团水解；

(2) 蛋白偶联过程中， 首先要通过实验确定合适的CouplingBuffer（主要包括CouplingBufferA、Coupling Buffer B、50 mM 硼酸溶液，pH8.5、100mM 磷酸缓冲液，100mMNaCl，pH7.4 这四种）；

(3) 确定合适的 CouplingBuffer 后，再以此 CouplingBuffer 为基础，确定合适的偶联蛋白浓度，因为蛋白浓度越高，偶联到磁珠上的蛋白的量会越大（这是由于NHS基团跟蛋白偶联和NHS 基团本身水解是一对竞争反应）。当然此处要综合考虑使用性能和成本，有些客户偶联少量的蛋白便可满足使用需求，这时采用低浓度的蛋白便可，这样可以降低成本。

(4) 封闭这一步可以采用试剂盒中自带的3M乙醇胺，也可使用Tris 缓冲液（100mMTris-HCl,150 mMNaCl, pH 8.0），封闭时间不得低于2h，如果化学封闭后背景仍然很高，还可以额外加一步 BSA 封闭。

蛋白偶联操作步骤

以下操作过程以取磁珠样品500μL，采用1.5mLEP 管为例介绍。用户可根据自身需求按比例调整：

1. 蛋白溶液配制：

取适量待偶联蛋白用 CouplingBuffer 溶解，配成浓度为≥3.0mg/mL 的蛋白溶液。已经保存于buffer 中的蛋白，需要通过透析或者脱盐的方法che底除去原有 buffer 里含伯胺基的物质，然后再用Coupling Buffer 配成浓度为≥3.0 mg/mL 的蛋白溶液，将配制好的蛋白溶液于 4ºC 保存备用。

注：(1)为了达到更好的性能，蛋白浓度≥3.0mg/mL，这样偶联效率会更高，此处需综合考虑成本和

使用要求；

(2)蛋白溶液中不能含有带伯氨基的成分，比如 Tris，甘an酸，明胶，BSA 等；

2. 磁珠清洗

1) 取 500μL20%的磁珠悬浮液于 1.5mLEP 管中。

注：磁珠取样前要反复颠倒、使用涡旋振荡器使其混合均匀，以保证实验的同一性，每取一次样需要重新混匀。

2) 将EP 管置于磁性分离架内，富集磁珠，去除上清液。

3) 加 1mL2~8ºC 的WashingBufferA于离心管中，涡旋 15s，使磁珠混合均匀。

4) 将EP 管置于磁性分离架内，富集磁珠，去除上清液。

3. 蛋白质固定

1) 加 200μL 蛋白溶液于EP 管中，涡旋 30s，使其混合均匀。

注：磁珠洗涤后要立即加入蛋白溶液。

2) 将EP 管涡旋 15s，置于垂直混合仪上，室温混合 2~4h。如果垂直混合不均匀，则反应前 30min，每隔 5min 取下EP 管涡旋 15s。此后，每隔 15min，取下EP 管涡旋 15s。

注：如有需要可以在 4ºC 反应过夜。

3) 采用磁性分离架富集磁珠，保存流穿液。

4. 磁珠封闭

1) 加 1mLBlocking Buffer 于 EP 管中，涡旋 30s，将EP 管置于磁性分离架内，富集磁珠，弃上清液。

注：Blocking Buffer除了试剂盒中提供的 3M 乙醇胺外，也可以使用 100mMTris-HCl,150mM NaCl, pH 8.0 等其它封端试剂。

2) 重复“步骤4-1"四次。

3） 加 1mLBlockingBuffer于EP 管中，涡旋 30s，将EP 管置于垂直混合仪中室温反应 2h。

4） 将EP 管置于磁性分离架内，富集磁珠，弃上清液。

5） 加 1mL 超纯水于EP 管中，充分混合，用磁力架富集磁珠，弃上清液。

5. 保存

1） 加 1mLStorageBuffer（比如含 0.05%叠氮化na的PBS 缓冲液，或者客户根据自己实际需求选择合适的保存溶液 ）于 EP 管中，充分混合，用磁力架富集磁珠，弃上清液。重复该操作 2 次。

2） 加入 1mLStorageBuffer 于EP 管中，充分混合，4ºC 保存备用。

注：最终偶联蛋白的磁珠浓度为 10%(v/v)。

注意事项

1. 磁珠对水分敏感。为了保证产品质量，在取样之后需立即盖上瓶盖，并用封口膜密封，于4℃保存。

2. 禁止将磁珠干燥或冷冻。干燥和冷冻操作可能导致磁珠的聚集从而丧失结合活性。

3. 可通过直接法（BCA ）检测偶联到磁珠表面的蛋白含量。使用280nm附近的波长来测定蛋白含量是不可取的，因为NHS 基团在280nm波长附近有很强的吸收，会严重干扰检测结果。蛋白稳定剂（如 BSA，gelatin）会抑制抗体与磁珠的结合，因此在磁珠偶联抗体过程中，需要确保抗体保存体系中不存在含伯氨基的蛋白稳定剂。

4. 缓冲液中含有带伯胺的物质会抑制蛋白质偶联到磁珠表面，去除伯胺物质可采用透析和脱盐的方法。

5. NHS 基团易水解，故在用 WashingBufferA 洗涤时，一定要参照说明书进行。

6. 蛋白溶液要预先配制好，WashingBufferA 洗涤完毕后，要立即加入蛋白溶液进行偶联反应。

7. 蛋白质和磁珠的偶联效率因蛋白质种类和性质差异而不同。一般而言，蛋白质浓度为≥3.0mg/mL 时利于蛋白质偶联；然而，对于不同的蛋白其浓度需要优化。

NHS磁珠   辅助试剂-常备现货

产品订购信息

M0239 NHS磁珠 Magrose-NHS Magrose-NHS magnetic beads  1ml/5ml