诺博莱德 NEB10-beta感受态细胞
NEB10-beta感受态细胞 载体构建
产品货号:C9338
产品名称:NEB10-beta感受态细胞
产品规格:20*100ul
产品简介:
储存条件:-70℃
具体产品的参数以收到产品说明书的参数为准
NobleRyderC9338 NEB10-beta感受态细胞是采用大肠杆菌NEB10-beta菌株经特殊工艺处理得到的感受态细胞,可用于DNA的化学转化。使用pUC19质粒检测,转化效率可达108cfu/μg。
基因型:
araD139∆(ara-leu)7697fhuAlacX74galK(f80∆(lacZ)M15)mcrAgalUrecA1endA1nupGrpsL(StrR)∆(mrr-hsd RMS mcrBC)
产品特点:
1. 大肠杆菌K12菌株背景,DH10B菌株的衍生菌株,核基因中具有链mei素抗性基因(StrR)。
2. 可转化大质粒和BACs。
3. DNA重组缺陷(recA1)和内切酶I缺陷(endA1)的特点有利于DNA克隆的稳定和高纯度质粒DNA的提取。
4. 对T1噬菌体有抵抗能力(fhuA2)。
5. 无需添加IPTG,只加X-gal即可检测β半乳糖苷酶活性,用于蓝白斑筛选。
操作方法:(以下操作均按无菌条件的标准进行)
1. 取感受态细胞置于冰浴中。
2. 向感受态细胞悬液中加入目的DNA,轻轻旋转离心管以混匀内容物,在冰浴中静置30分钟。
3. 将离心管置于42℃水浴中放置60秒钟,然后快速将管转移到冰浴中,使细胞冷却2分钟,该过程不要摇动离心管。
4. 向每个离心管中加入500μL无菌的SOC或LB培养基(不含抗生素),混匀后置于 37℃150rpm,摇床振荡培养60分钟,目的是使质粒上相关的抗性标记基因表达,使菌体复苏。
5. 无菌条件下,取适量菌液加到含相应抗生素的LB固体培养基平板上,用无菌的细菌涂布器或玻璃珠将细胞均匀涂开。等平板中的液体wan全吸收后,倒置平板,37℃培养12-16小时。
6. 保留剩余的菌液于 4℃冰箱中,视平板上菌落生长情况决定去留。
注意事项:
1.感受态细胞应保存在-70℃,不可反复冻融,否则其转化效率将会降低。
2.实验过程中应严格无菌操作,防止其它DNA或杂菌的污染,避免为以后的筛选、鉴定带来影响。
3.转化时,转化效率与外源DNA的浓度在一定范围内成正比,但当加入的外源DNA量过多或体积过大反而会降低转化效率。转化时DNA体积要小于感受态细胞体积的十分之一。
4.转化率的计算:转化率=产生菌落的总数/铺板DNA总量。
5.为防止转化实验不成功,可以保留部分连接产物,以重新转化,将损失降到*低。
NEB10-beta感受态细胞 载体构建
产品订购信息
C9338 NEB10-beta感受态细胞 20*100ul
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