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dam-/dcm-感受态细胞 载体构建
简要描述:

产品货号:C9108
产品名称:dam-/dcm-感受态细胞
产品规格:20*100ul
产品简介:
储存条件:-70℃
dam-/dcm-感受态细胞 载体构建

  • 产品型号:C9108
  • 厂商性质:经销商
  • 更新时间:2025-03-21
  • 访  问  量:117
详情介绍

诺博莱德 dam-/dcm-感受态细胞

 

dam-/dcm-感受态细胞   载体构建

产品货号:C9108

产品名称:dam-/dcm-感受态细胞

产品规格:20*100ul

产品简介:

储存条件:-70℃

 

具体产品的参数以收到产品说明书的参数为准

NobleRyderC9108 dam-/dcm-感受态细胞是采用大肠杆菌dam-/dcm-菌株经特殊工艺处理得到的感受态细胞。dam-/dcm-菌株来源于大肠杆菌K12菌株,该菌株为dam和dcm甲基化酶失活突变型菌株,常用于质粒DNA的去dam和dcm甲基化处理,消除dam和dcm甲基化对酶切的影响。核酸内切酶 (endA1)基因的缺失有利于提高质粒DNA的产量和质量。甲基化酶的失活突变可能会导致质粒DNA在该菌株中会出现突变,不建议连接产物的转化实验,仅用于质粒转化。菌株还具有抗T1 噬菌体感染的特点。pUC19质粒检测转化效率>×106cfu/μgDNA。

基因型:ara-14 leuB6 fhuA31 lacY1 tsx78 glnV44 galK2 galT22mcrA dcm-6 hisG4 rfbD1 R(zgb210::Tn10)TetS endA1 rspL136 (StrR)dam13::Tn9 (CamR) xylA-5 mtl-1 thi-1 mcrB1 hsdR2

菌株抗性: 对氯mei素、链mei素有抗性;对氨苄青mei素、卡那mei素、壮观mei素和四环素敏感。

操作方法:(以下操作均按无菌条件的标准进行)

1. 将感受态细胞置于冰水浴中化冻。待细胞刚化冻后,加入1-5μL含有1-100ng的质粒DNA到细胞中,用手指bo打管底,轻轻混匀。

2. 冰水浴中静置30分钟。

3. 42℃热击60秒钟,不要晃动。

4. 冰水浴中静置2分钟。

5. 加入500μL 的室温SOC或LB培养基。

6. 置于37℃摇床中,150-200rpm震荡复苏培养60分钟。

7. 取50-100μL 菌液涂布在含有抗性的LB平板上。待液体吸干后,倒置平板,37℃培养 12-18 小时。

(平板划线分离法:复苏培养结束后,12000rpm 离心30秒钟,弃掉上清,留100μL左右的液体,用200μL 吸头轻轻吹打散菌块,取10μL重悬的菌液分多点滴在平板上,倾斜吸头,用吸头头部的侧面将滴在平板上的液 体来回划线。这个方法可以获得更大的单克隆菌落。此方法主要适用于质粒转化,连接产物转化最好用涂布法。)

(质粒快速转化步骤:将步骤2的时间缩短到5分钟,对于氨苄青mei素抗性的质粒,步骤4完成后,可直接涂布或划线于含氨苄青mei素抗性的LB平板上。其它抗性的质粒仍需60分钟的复苏培养。)

注意事项:

1.感受态细胞应保存在-70℃,不可反复冻融,否则其转化效率将会降低。

2.实验过程中应严格无菌操作,防止其它DNA或杂菌的污染,避免为以后的筛选、鉴定带来影响。

3.转化时,转化效率与外源DNA的浓度在一定范围内成正比,但当加入的外源DNA量过多或体积过大反而会降低转化效率。转化时DNA体积要小于感受态细胞体积的十分之一。

4.转化率的计算:转化率=产生菌落的总数/铺板DNA总量。

5.为防止转化实验不成功,可以保留部分连接产物,以重新转化,将损失降到*低。

 

dam-/dcm-感受态细胞   载体构建


产品订购信息

C9108 dam-/dcm-感受态细胞  20*100ul


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