产品货号：T0098
产品名称：TaqMan One Step RT-qPCR Kit
产品别名：Taqman一步法荧光定量PCR试剂盒，一步法实时荧光定量试剂盒
产品规格：50T/200T
产品简介：
储存条件：Store at -20℃，1 year.
Taqman一步法荧光定量PCR试剂盒 核酸检测

诺博莱德  TaqMan One Step RT-qPCR Kit

Taqman一步法荧光定量PCR试剂盒   核酸检测

产品货号：T0098

产品名称：TaqMan One Step RT-qPCR Kit

产品别名：Taqman一步法荧光定量PCR试剂盒，一步法实时荧光定量试剂盒

产品规格：50T/200T

产品简介：

储存条件：Store at -20℃，1 year.

具体产品的参数以收到产品说明书的参数为准

NobleRyderT0098  TaqMan One Step RT-qPCR Kit本产品是采用探针法（TaqMan，Molecular Beacon等）进行一步法Real-Time RTqPCR的专用试剂盒。使用本产品进行RealTime RT-qPCR反应时，逆转录和定量PCR在同一反应体系中进行，反应过程中无需添加试剂，无需打开管盖，避免了污染的同时提高了实验效率。本产品的检测灵敏度高，荧光信号强，信噪比高，非常适合于RNA病毒等微量RNA的检测。其所包含的特殊缓冲系统能使逆转录酶与DNA聚合酶同时发挥最大功效，提高反应效率。使用本产品可以得到更宽广的线性范围，对目的基因定量更准确，重复性好，可信度高。

试剂原理：

TaqMan One Step RT-qPCR kit 首先利用反转录酶RTase将RNA反转录成cDNA，再以cDNA为模板 通过热启动DNA扩增酶在单管闭管反应体系中连续进行PCR扩增反应，利用荧光标记探针（Probe） 水解发光，并对发光信号进行检测。

1. RT-PCR

首先采用反转录酶以RNA为模板合成 cDNA，然后再以合成的cDNA为模板，经过PCR扩增反应的 热变性、引物退火、链延伸三个步骤循环往复，在短时间内扩增得到大量DNA片段。

2. 荧光检出

TaqMan 探针法是使用 5’端带有荧光物质，3’端带有淬灭物质的 TaqMan 探针进行荧光检测的方法。 在探针没有被 Taq 酶分解时，5’端的荧光物质受到 3’端淬灭物质的制约，不能发出荧光。而当 TaqMan 探针被分解后，5’端的荧光物质便会游离出来，发出荧光。在 PCR 反应液中加入荧光探针后的退火 过程中，荧光探针便会和模板配对区域结合。在 PCR 反应的延伸过程中，TaqDNA聚合酶的 5’→3’ 核酸外切酶活性可以分解和模板杂交的荧光探针，游离出的荧光物质便会发出荧光。通过检测反应 体系中的荧光强度，可以达到检测 PCR 产物扩增量的目的。

RT-PCR 反应体系配制

1. 通常引物终浓度为0.2μM可以得到较好结果。反应性能较差时，可以在0.1～1.0μM范围内调整引物浓度；

2. 通常探针浓度可在0.1～0.3μM范围内优化。可进行浓度梯度的实验，寻找引物和探针的优良组合。探针的使用与RealTimePCR扩增仪、探针种类、荧光标记物质种类有关，请参照仪器说明书或各荧光探针的具体使用要求进行；

3. 不同种类的模板中含有的靶基因的拷贝数不同，必要时可进行梯度稀释，确定优良的模板添加量。

质量控制：

1. 功能检测：qPCR的敏感性、特异性、可重复性；

2. 无外源核酸酶活性，无外源内切、外切核酸酶污染。

技术说明：

1. 该体系常用50℃进行反转录反应，可以在45℃~60℃范围内进行反转录温度优化；根据反应特征不同，可以在5~30分钟内对反转录时间进行优化；

2. 该体系所用的反转录酶是在MMLV基础上进行了基因改造，去除了RNaseH活性，使其具有更高的温度耐受性和反转录温度，对RNA复杂结构模板具有更高的反转录效率；

3. 该体系具有更好的体系稳定性和适用性，非常适合于病毒类、组织提取RNA复杂模板的检测；对极限浓度模板的扩增效果更加稳定。

Taqman一步法荧光定量PCR试剂盒   核酸检测

产品订购信息

T0098  TaqMan One Step RT-qPCR Kit  50T/200T