适用于本试剂盒采用碱裂解法裂解细胞，根据离心吸附柱在高盐状态下特异性地结合溶液中的DNA的原理特异性提取质粒DNA。 离心吸附柱中采用的硅基质材料能高效、专一地吸附DNA，可最大限度去除杂质蛋白及细胞中其他有机化合物，一般从50-100ml大肠杆菌LB培养液中，可快速提取200-300μg高纯度高拷贝的质粒DNA，提取率达85-90%。
质粒大量提取试剂盒 质粒提取 -常备现货

NobleRyder 质粒大量提取试剂盒 Plasmid Extraction Maxi Kit

质粒大量提取试剂盒 质粒提取 -常备现货

产品货号：D9998

产品名称：质粒大量提取试剂盒 Plasmid Extraction Maxi Kit

英文名称：Plasmid Extraction Maxi Kit

产品规格：10T

产品简介：

储存条件：酶附件-20℃，其它试剂RT，复检期1年

具体产品的参数以收到产品说明书的参数为准

  NobleRyder  D9998  质粒大量提取试剂盒适用于本试剂盒采用碱裂解法裂解细胞，根据离心吸附柱在高盐状态下特异性地结合溶液中的DNA的原理特异性提取质粒DNA。 离心吸附柱中采用的硅基质材料能高效、专一地吸附DNA，可最大限度去除杂质蛋白及细胞中其他有机化合物，一般从50-100ml大肠杆菌LB培养液中，可快速提取200-300μg高纯度高拷贝的质粒DNA，提取率达85-90%。 使用本试剂盒提取的质粒DNA可适用于各种常规操作，包括酶切、PCR、测序、连接和转化等试验。

使用前请先在漂洗液中加入无水yi醇，加入体积请参照瓶体上的标签。溶液Ⅰ在使用前先加入RNaseA（将试剂盒中提供的 RNaseA 全部加入），混匀，置于 2-8℃保存。如非指明，所有离心步骤均为使用台式离心机在室温下离心。

操作步骤（仅供参考）:

1. 取 50-100mL 细菌培养物，11000rpm 离心 10min，尽量吸除上清（菌液较多时可以通过多次离心将菌体沉淀收集到一个离心管中）。

2. 向留有菌体沉淀的离心管中加入5mL溶液Ⅰ(请先检查是否已加入RNase A），使用移液器或旋涡振荡器che底悬浮细菌细胞沉淀。注意：如果菌块未che底混匀，会影响裂解导致质粒提取量和纯度偏低。

3. 向离心管中加入5mL溶液Ⅱ，温和地上下翻转6-8次使菌体充分裂解。注意：混匀一定要温和，以免污染细菌基因组 DNA，此时菌液应变得清亮粘稠，作用时间不要超过 5min，以免质粒受到破坏。

4. 向离心管中加入7mL溶液Ⅲ，立即温和地上下翻转6-8次，充分混匀，此时会出现白色絮状沉淀，此时会出现白色絮状沉淀(如菌液过多，可在此步放置5分钟，以尽可能的降解RNA)。11000rpm 离心 10 分钟，用移液器小心地将上清转移到另一个干净的离心管中，注意尽量不要吸出沉淀。注意：溶液Ⅲ加入后应立即混合，避免产生局部沉淀。如果上清中仍有少量絮状沉淀，可再次离心取上清。

5. 取上一步上清，加入0.5倍体积无水乙醇，充分混匀。（体积过多可分两次混合，然后上柱）

6. 将上一步所得混合液加入吸附柱中(吸附柱加入收集管中)，室温放置2-3min，11000rpm离心30-60s，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中(如果为了提高得率，可将收集管中的液体加入吸附柱再次吸附一次)。

7. 向吸附柱中加入8mL漂洗液(使用前请先检查是否已加入无水乙醇)，11000rpm离心2min，弃废液，将吸附柱放入收集管中。

8. 向吸附柱中加入6mL漂洗液，11000rpm离心2min，弃废液，将吸附柱放入收集管中。

9. 11000rpm 离心 5min，将吸附柱敞口置于室温或50℃温箱放置数分钟，目的是将吸附柱中残余的漂洗液去除，否则漂洗液中的乙醇会影响后续的实验，如酶切、PCR等。

10. 将吸附柱放入一个干净的离心管中，向吸附膜中央悬空滴加1-2mL经65℃水浴预热的洗脱液，室温放置5min，11000rpm离心2min。

11. 为了增加质粒的回收效率，可将得到的洗脱液重新加入吸附柱中，室温放置 5min，11000rpm 离心2min。

注意事项：

1. 使用前请先检查溶液Ⅱ和溶液Ⅲ是否出现混浊，如有混浊现象，可在 37℃水浴中加热几分钟，待溶液恢复澄清后再使用。溶液Ⅱ、溶液Ⅲ、漂洗液使用后应立即拧紧盖子。

2. 洗脱缓冲液体积不应少于500μL，体积过小影响回收效率；洗脱液的pH值对洗脱效率也有影晌，若需要用水做洗脱液应保证其pH值在8.0左右(可用NaOH将水的pH值调至此范围)，pH 值低于7.0会降低洗脱效率，DNA产物应保存在-20℃，以防DNA降解。

3. 如果所提质粒为低拷贝质粒或大于 10kb 的大质粒，应加大菌体使用量，使用 100-200mL过夜培养物，同时按照比例增加溶液Ⅰ、溶液Ⅱ和溶液Ⅲ的用量，吸附和洗脱时可以适当的延长时间，以增加提取效率。

4. DNA 浓度及纯度检测：得到的质粒DNA纯度与样品保存时间、操作过程中的剪切力等因素有关。得到的 DNA 可用琼脂糖疑胶电泳和紫外分光光度计检测浓度与纯度。DNA 应在OD260处有显著吸收峰，OD260值为1相当于大约50ug/mL双链DNA、40ug/mL单链DNA。OD260/OD280比值应为 1.7-1.9，如果洗脱时不使用洗脱缓冲液，而使用去离子水，比值会偏低，因为pH值和离子存在会影响吸光值，但并不表示纯度低。

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产品订购信息

D9998  质粒大量提取试剂盒 Plasmid Extraction Maxi Kit  10T