土壤酸性转化酶（Solid-Acid invertase, S-AI）试剂盒说明书

微量法 100 管/48 样

正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定测定意义：

S-AI 在pH 为 4.5~5.0（酸性）条件下催化蔗糖不可逆地分解为果糖和葡萄糖，是土壤微生物蔗糖代谢关键酶之一。

测定原理：

S-AI 催化蔗糖降解产生还原糖，进一步与 3,5－二硝基水杨酸反应，生成棕红色氨基化合物，在 510nm有特征光吸收，在一定范围内 510nm 光吸收增加速率与AI 活性成正比。

土壤酸性转化酶试剂盒   土壤系列-常备现货

试剂组成和配制：

试剂二：粉剂×1 瓶，4℃保存；临用前加入 25ml 试剂一充分溶解备用；用不完的试剂 4℃保存。

自备仪器和用品：

可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅、移液器、微量石英比色皿/96 孔板和蒸馏水。

样品处理：

新鲜土样自然风干或 37 度烘箱风干，过 30~50 目筛。

测定步骤和加样表：

混匀， 37℃准确水浴 30min 后，95℃水浴 10min（盖紧，以防水分散失），流水冷却后充分混匀（以保证浓度不变），10000g 25℃离心 10min，取上清液；

混匀，95℃水浴 10min（盖紧，以防止水分散失），流水冷却后充分混匀， 510nm 处，记录各管吸光值A，如果吸光值大于 2，可以用蒸馏水稀释后测定(计算公式中乘以相应稀释倍数)，ΔA=A 测定-A 对照。

S-A I 活性计算：

a. 用微量石英比色皿测定的计算公式如下

标准条件下测定的回归方程为y = 0.0016x -0.001；x 为标准品浓度（μg/ml），y 为吸光值。单位的定义：每天每 g 土样中产生 1mg 还原糖定义为一个S-AI 活力单位。

S-AI 活力（mg/d /g 土样）＝[(ΔA +0.001) ÷0.0016×V 反总÷W÷T ÷1000=240×(ΔA+0.001)

V 反总：反应体系总体积：0.4ml；T：反应时间，1/48d； W：样本质量，0.05g；1mg=1000μg。

b. 用 96 孔板测定的计算公式如下

标准条件下测定的回归方程为y = 0.0008x -0.001；x 为标准品浓度（μg/ml），y 为吸光值。单位的定义：每天每 g 土样中产生 1mg 还原糖定义为一个S-AI 活力单位。

S-AI 活力（mg/d/g 土样）＝[(ΔA +0.001) ÷0.0008×V 反总÷W÷T ÷1000=480×(ΔA+0.001)

V 反总：反应体系总体积：0.4ml；T：反应时间，1/48d； W：样本质量，0.05g；1mg=1000μg。

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