β-淀fen酶（β-amylase，β-AL）试剂盒

（ 微量法 100T/48S）

正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定测定意义：

淀fen酶负责水解淀粉，主要包括α-淀fen酶和β-淀fen酶。β-淀fen酶(EC 3.2.1.2)可随机地作用于淀粉中的α-1,4-糖苷键，生成葡萄糖、麦芽糖、麦芽三糖、糊精等还原糖。

测定原理：

还原糖还原 3,5-二硝基水杨酸生成棕红色物质。α-淀fen酶不耐酸，β-淀fen酶不耐热。根据上述特性，钝化其中之一，就可测出另一种淀fen酶的活力。

β-淀fen酶试剂盒   淀粉系列-常备现货

组成：

试剂一：30ml×1 瓶，常温保存，若有黄色晶体析出，需 90℃加热溶解后再用；试剂二：15ml×1 瓶，4℃保存，若出现沉淀析出，需 70℃加热溶解后再用。

具体产品的参数以收到产品说明书的参数为准

自备仪器和用品：

可见分光光度计/酶标仪、恒温水浴锅、离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96 孔板、研钵和蒸馏水。

粗酶液提取

组织：称取 0.1~0.2g 样本（建议称取约 0.1g 样本），加入 1ml 蒸馏水，研磨匀浆；将匀浆倒入离心管中，提取液在室温下放置提取 15min，每 5min 振荡 1 次，使其充分提取；3000g，25℃离心 10min，取上清液加蒸馏水定容至 10 ml，摇匀，即淀fen酶原液。

吸取上述淀fen酶原液 1ml，加入 4ml 蒸馏水，摇匀，即为淀fen酶稀释液，用于（α＋β）淀fen酶总活力的测定。

血清（浆）等液体样本：（1）直接检测α-淀fen酶。（2）吸取淀fen酶原液 1ml，加入 4ml 蒸馏水，摇匀，即为淀fen酶稀释液，用于（α＋β）淀fen酶总活力的测定。

测定步骤：

1、分光光度计或酶标仪预热 30min 以上，调节波长到 540 nm，蒸馏水调零。

2、试剂一和试剂二 40℃预热 10min.

3、测定操作表：

70℃水浴 15min 左右，冷却

40℃恒温水浴中准确保温 5min

混匀，95 度水浴 5min，冷却，取 200μl 至微量石英比色皿或 96 孔板中，540nm 处读取吸光值，从左到右分别记为A1、A2、A3 和A4。每个测定管需设一个对照管。

酶活性计算：

a. 用微量石英比色皿测定的计算公式如下

1、标准条件下测定回归曲线为y=3.7215x -0.1778； x 为标准品浓度（mg/ml），y 为吸光值。

2、α- 淀fen酶活性

（1） 按照样本质量计算

单位定义：每 g 组织每分钟催化产生 1mg 还原糖定义为 1 个酶活力单位。

α- 淀fen酶活性(mg/min/g 鲜重)=[(A2-A1＋0.1778)÷3.7215×V 反总]÷(W×V 样÷V 样总)÷T

=1.075×(A2-A1＋0.1778)÷W

（2） 按照蛋白质含量计算

单位定义：每 mg 组织蛋白每分钟催化产生 1mg 还原糖定义为 1 个酶活性单位。

α- 淀fen酶活性(mg/min/mg prot)= [(A2-A1＋0.1778)÷3.7215×V 反总]÷（V 样×Cpr）÷T

=0.1075×(A2-A1＋0.1778) ÷Cpr

（3） 血清（浆）等液体样本中α- 淀fen酶活性计算

单位定义：每 ml 血清（浆）每分钟催化产生 1mg 还原糖定义为 1 个酶活性单位。

α- 淀fen酶活性(mg/min/ml)= [(A2-A1＋0.1778)÷3.7215×V 反总]÷V 样÷T=0.1075×(A2-A1＋0.1778)

3、总淀fen酶活性计算

（1） 按照样品质量计算

单位定义：每 g 组织每分钟催化产生 1mg 还原糖定义为 1 个酶活力单位。

总淀fen酶活性(mg/min//g 鲜重)=5×[(A4-A3＋0.1778)÷3.7215×V 反总]÷(W×V 样÷V 样总)÷T=5.375×(A4-A3＋0.1778)÷W

（2） 按照蛋白质含量计算

单位定义：每 mg 组织蛋白每分钟催化产生 1mg 还原糖定义为 1 个酶活力单位。

总淀fen酶活性(mg/min/mg prot)=5×[(A4-A3＋0.1778)÷3.7215×V 反总]÷（V 样×Cpr）÷T

=0.5375×(A4-A3＋0.1778) ÷Cpr

（3） 血清（浆）等液体样本中总淀fen酶活性计算

单位定义：每 ml 血清（浆）每分钟催化产生 1mg 还原糖定义为 1 个酶活性单位。

总淀fen酶活性(mg/min/ml) =5×[(A4-A3＋0.1778)÷3.7215×V 反总]÷V 样÷T

=0.5375×(A4-A3＋0.1778)

4、β-淀fen酶活性计算

（1） 按照样本质量计算

单位定义：每g 组织在反应体系中每分钟催化产生 1mg 还原糖定义为 1 个酶活力单位。

β-淀fen酶活性(mg/min/g  鲜重)=淀fen酶总活性-α-淀fen酶活性=[5.375×(A4-A3＋0.1778)-1.075×(A2-A1＋0.1778)]÷W

（2） 按照蛋白质含量计算

单位定义：每mg 组织蛋白每分钟催化产生 1mg 还原糖定义为 1 个酶活力单位。

β-淀fen酶活性（mg/min/mg prot）=淀fen酶总活性-α-淀fen酶活性=[0.5375×(A4-A3＋0.1778)-0.1075× (A2-A1＋0.1778)]÷Cpr

（3） 血清（浆）等液体样本中β-淀fen酶活性计算

单位定义：每ml 血清（浆）每分钟催化产生 1mg 还原糖定义为 1 个酶活性单位。

β-淀fen酶活性（mg/min/ml）=淀fen酶总活性-α-淀fen酶活性=0.5375×(A4-A3＋0.1778)-0.1075×(A2-A1＋0.1778)

5：总淀fen酶稀释倍数；V 反总：反应体系总体积，0.15ml；V 样：加入反应体系中样本体积，0.075 ml； V 样总：提取液总体积，10 ml； Cpr：样本蛋白质浓度，mg/ml；W：样本质量，g；T：反应时间，5min。

b. 用 96 孔板测定的计算公式如下

1、标准条件下测定回归曲线为y=2.481x -0.1778； x 为标准品浓度（mg/ml），y 为吸光值。

2、α- 淀fen酶活性

（1） 按照样本质量计算

单位定义：每g 组织每分钟催化产生 1mg 还原糖定义为 1 个酶活力单位。

α- 淀fen酶活性(mg/min/g 鲜重)=[(ΔA＋0.1778)÷2.481×V 反总]÷(W×V 样÷V 样总)÷T=1.612×(ΔA＋0.1778)÷W

（2） 按照蛋白质含量计算

单位定义：每mg 组织蛋白每分钟催化产生 1mg 还原糖定义为 1 个酶活性单位。

α- 淀fen酶活性（mg/min/mg prot）=[(ΔA＋0.1778)÷2.481×V 反总]÷（V 样×Cpr）÷T =0.1612×(ΔA＋0.1778)÷Cpr

（3） 血清（浆）等液体样本中α- 淀fen酶活性计算

单位定义：每ml 血清（浆）每分钟催化产生 1mg 还原糖定义为 1 个酶活性单位。

α- 淀fen酶活性（mg/min/ml）=[(ΔA＋0.1778)÷2.481×V 反总]÷V 样÷T =0.1612×(ΔA＋0.1778)

3、总淀fen酶活性计算

（1） 按照样本质量计算

单位定义：每g 组织每分钟催化产生 1mg 还原糖定义为 1 个酶活力单位。

总淀fen酶活性(mg/min/g 鲜重)=5×[(A4-A3＋0.1778)÷2.481×V 反总]÷(W×V 样÷V 样总)÷T

=8.06×(ΔA＋0.1778)÷W

（2） 按照蛋白质含量计算

单位定义：每mg 组织蛋白每分钟催化产生 1mg 还原糖定义为 1 个酶活力单位。

总淀fen酶活性(mg/min/mg prot)=5×[(A4-A3＋0.1778)÷2.481×V 反总]÷（V 样×Cpr）÷T

=0.806×(A4-A3＋0.1778) ÷Cpr

（3） 血清（浆）等液体样本中总淀fen酶活性计算

单位定义：每 ml 血清（浆）每分钟催化产生 1mg 还原糖定义为 1 个酶活性单位。总淀fen酶活性(mg/min/ml)=5×[(A4-A3＋0.1778)÷2.481×V 反总]÷V 样÷T=0.806×(A4-A3＋0.1778)

4、β-淀fen酶活性计算

（1） 按照样本质量计算

单位定义：每 g 组织在反应体系中每分钟催化产生 1mg 还原糖定义为 1 个酶活力单位。

β-淀fen酶活性(mg/min/g 鲜重)=淀fen酶总活性-α-淀fen酶活性=[8.06×(A4-A3＋0.1778)-1.612×(A2-A1＋0.1778)]÷W

（2） 按照蛋白质含量计算

单位定义：每 mg 组织蛋白每分钟催化产生 1mg 还原糖定义为 1 个酶活力单位。

β-淀fen酶活性（mg/min/mg prot）=淀fen酶总活性-α-淀fen酶活性=[0.806×(A4-A3＋0.1778)-0.1612× (A2-A1＋0.1778)]÷Cpr

（3） 血清（浆）等液体样本中β-淀fen酶活性计算

单位定义：每 ml 血清（浆）每分钟催化产生 1mg 还原糖定义为 1 个酶活性单位。

β-淀fen酶活性（mg/min/ml）=淀fen酶总活性-α-淀fen酶活性=0.806×(A4-A3＋0.1778)-0.1612×(A2-A1＋0.1778)

5：总淀fen酶稀释倍数；V 反总：反应体系总体积，0.15ml；V 样：加入反应体系中样本体积，0.075 ml； V 样总：提取液总体积，10 ml； Cpr：样本蛋白质浓度，mg/ml；W：样本质量，g；T：反应时间，5min。

β-淀fen酶试剂盒   淀粉系列-常备现货