销售咨询热线：
13269190901
λ噬菌体基因组DNA快速提取试剂he（离心柱型）
λ噬菌体基因组DNA快速提取试剂he 核酸提取
目录号：40212
目录编号 | 包装单位 |
40212-50 | 50次 |
40212-100 | 100次 |
适用范围：
适用于快速λ噬菌体DNA
试剂盒组成、储存、稳定性：
试剂盒组成 | 保存 | 50次 | 100次 |
RNase A | -20℃ | 20 mg | 20 mg X 2 |
DNase I | -20℃ | 50mg | 50 mg X 2 |
噬菌体沉淀液 | 室温 | 100ml | 100ml X 2 |
裂解缓冲液 | 室温 | 30ml | 60ml |
杂质沉淀液 | 室温 | 5ml | 10ml |
结合液LB | 室温 | 20ml | 40ml |
漂洗液WB | 室温 | 15ml | 25ml |
洗脱缓冲液EB | 室温 | 10ml | 15ml |
吸附柱AC | 室温 | 50个 | 100个 |
收集管（2ml） | 室温 | 50个 | 100个 |
本试剂盒在室温储存12个月不影响使用效果。
储存事项:
1. 在RNase A管和DNase I管分别加入1毫升的裂解缓冲液吹打，颠倒混匀，充分溶解RNase A和DNase I后， 按照每次使用量分装－20℃冻存，有效期6个月。
2. 结合液LB低温时可能出现析出和沉淀，可以在37℃水浴几分钟帮助重新溶解，恢复澄清透明后冷却到室温即可使用。
3. 避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、pH值变化，各溶液使用后应及时盖紧盖子。
具体产品的参数以收到产品说明书的参数为准
产品介绍：
λ噬菌体载体广泛用于文库筛选，目的克隆培养获得大量的噬菌体颗粒需要提取λ噬菌体DNA来开展测序等后续工作。λ噬菌体裂解培养物离心后的上清，首先用RNase A /DNase I混合mei消化去除残留的宿主菌DNA/RNA，沉淀收集噬菌体，噬菌体被SDS裂解，残留碎片通过沉淀离心去除掉。裂解物上清中的λ噬菌体DNA在高离序盐状态下选择性吸附于离心柱内硅基质膜，再通过一系列快速的漂洗－离心的步骤，将盐、细胞代谢物、蛋白等杂质去除，zui后低盐的洗脱缓冲液将λ噬菌体DNA从硅基质膜上洗脱。
产品特点：
1. 不需要使用有毒的苯fen等试剂，也不需要乙chun沉淀等步骤。
2. 节省时间，简捷，可用于液体培养裂解物和固体培养板的提取，单个样品操作一般可在1.5小时内完成。
3. 产量高，典型的产量10ml λ噬菌体裂解培养物上清可以提取约10µg λ噬菌体DNA。
4. 多次柱漂洗确保高纯度，OD260/OD280典型的比值达1.7～1.9。可以直接用来mei切和测序。
1. 使用转速可以达到13,000rpm的冷冻离心机。
2. 开始实验前将需要的水浴先预热到37℃备用。
3. 需要自备lv仿，20％SDS。
结合液LB含有刺激性化合物，操作时要戴乳胶手套，避免沾染皮肤，眼睛和衣
4. 服。若沾染皮肤、眼睛时，要用大量清水或者生理盐水冲洗。
操作步骤：（实验前请先阅读注意事项）
以10 ml噬菌体感染细菌培养上清提取举例：
提示：
ð 第一次使用前请先在漂洗液WB中加入zhi定量无水乙chun，充分混匀，加入后请及时在方框打钩标记已加入乙chun，以免多次加入!
ð 将噬菌体沉淀液放在冰上预冷。
1. 将0.5%lv仿处理后的λ噬菌体感染的液体培养物10,000g（约12,000rpm） 4℃离心10分钟去除细胞碎片和残渣。
转速不能过高，时间不能过长，否则噬菌体可能和碎片一起沉淀，降低产量。
2. 取10ml上清，加入20μl RNase和20μl DNase充分混匀37℃温育30分钟。
每个噬菌体培养上清因生长和裂解情况不同而残留RNA/DNA量不等。RNase/DNase消化过头，可能减少产量；消化不wan全，可能未消化的DNA/RNA和细胞碎片粘去部分噬菌体减低产量并/或者导致zui后污染宿主菌DNA，因此应该根据实际情况适当调节用量和消化时间。
3. 加入2 ml 冰预冷的噬菌体沉淀液，轻柔充分混匀后置冰上冷却（培养板裂解物必须在冰上放置30分钟）。
4. 10,000g（12,000rpm）4℃离心10分钟，弃上清，干燥1分钟。沉淀下来的噬菌体外观为透亮或者稍白的沉淀。
5. 加入500μl裂解缓冲液，吹打重悬噬菌体，加入100μl 20％SDS，立即轻柔颠倒混匀4-6次后，70℃温育10分钟，然后置冰上冷却。
6. 加入100μl杂质沉淀液，立即轻柔颠倒混匀4-6次，zui高速13,000g 4℃离心10分钟。
7. 仔细将上清转入新的离心管，加入350μl结合液LB，轻柔涡旋混匀。
8. 将上述混合物加入一个吸附柱AC中，（吸附柱放入收集管中）12,000rpm离心30秒，倒掉收集管中的废液。
吸附柱一次zui多只可以容纳大约700μl混合物，因此需要分次把混合物上到吸附柱内，重复步骤8。
9. 加入700μl漂洗液WB（请先检查是否已加入无水乙chun!），12,000rpm 离心30秒，弃废液。
10. 可选步骤：重复步骤9一遍。
11. 将吸附柱AC放回空收集管中，13,000rpm离心2分钟，尽量除去漂洗液， 以免漂洗液中残留乙chun抑制下游反应。
12. 取出吸附柱AC，放入一个干净的离心管中，在吸附膜的中间部位加100μl洗脱缓冲液EB（洗脱缓冲液事先在 50℃水浴中预热）， 室温放置1分钟，12,000rpm 离心1分钟。如果想得到较多量的DNA，可将得到的溶液重新加入离心吸附柱中，12,000rpm离心1分钟。
洗脱体积越大，洗脱效率越高，如果需要DNA浓度较高，可以适当减少洗脱体积， 但是zui小体积不应少于40μl，体积过小降低DNA洗脱效率，减少DNA产量。
13. DNA可以存放在2-8℃，如果要长时间存放，可以放置在-20℃。
问题 | 评论与建议 |
低核酸产量 | * 试剂盒储存在非zuijia条件-建议：收到试剂盒后总是存放在室温（15℃-20℃）。 * 缓冲液或者试剂暴露于减少它们有效性的条件下-建议：储存在室温（15℃-20℃），每次用完后立刻盖紧盖子，以免溶液蒸发，pH改变和污染。 * 漂洗液WB中忘记加无水乙chun-建议：第一次实验时，在漂洗液WB中加入zhi定量无水乙chun。 * 试剂和样品没有充分混匀-建议：加入每个试剂后都要充分混匀。 * 噬菌体上清滴度太低-建议：1.确认λ噬菌体已经wan全裂解了宿主菌（加入0.5%的lv仿可以帮助wan全裂解）；2.离心去除宿主菌碎片残渣时间不能超过10分钟，转速不超过10,000g，否则否则噬菌体也可能和碎片一起沉淀丢失；3.重新培养一次噬菌体感染细菌。 * DNase I/RNase消化不足或者过头-建议：消化过头，可能减少产量并导致zui后污染宿主菌DNA；消化不wan全，可能未消化的DNA，RNA和细胞碎片粘去部分噬菌体，因此可以适当调节用量。 |
宿主菌基因组 | * DNase I/RNase失活或者反应条件不佳-建议：DNase I/RNase必须溶解在裂解缓冲液中，必须分装冻存。λ噬菌体必须用LM(含镁离子)培养，在其它培养肉汤中，DNase消化活性可能受到影响。 |
加入噬菌体 | * 不适合的离心温度和离心力。-建议：10,000g（12,000rpm）4℃离心10分钟。 * 上清中含λ噬菌体太少-建议：离心前，样品置冰上冷却。参见前面滴度太低解决办法 |
λ噬菌体基因组DNA快速提取试剂he 核酸提取
电话
微信扫一扫
