FlashPure Universal Genomic DNA Kit

血液/细胞/组织/鼠尾/细菌基因组 DNA ti取试剂盒（离心柱型）

细胞基因组DNA快速ti取试剂盒 核酸提取

目录号:40110

产品内容：

自备试剂：

无水乙chun，RNase A（可选），溶菌mei（用于革兰氏阳性菌，可选）

保存条件：

室温（15~25℃）

蛋白mei K，室温可保存 6 个月，4℃保存 12 个月，~ 20℃保存 2 年。

具体产品的参数以收到产品说明书的参数为准 

产品简介：

适用于从xue液、培养细胞、动物组织、植物组织、鼠尾、细菌等样本中快速提取高质量的基因组DNA。

本试剂盒采用du特的裂解液，利用硅胶膜特异吸附DNA，无需fenlv仿等有毒试剂，也无需进行耗时的chun类沉淀，最大限度的去除蛋白及其他抑制性杂质，得到基因组DNA，无蛋白、核酸mei污染，可直接进行PCR、mei切和杂交等相关分子生物学实验。

产品特点:

1.    简便快速：30 min 内可获得高纯度的基因组 DNA。

2.    安全无毒：无需苯fen/lv仿抽提。

3.    高产：典型的产量 200µl 全血可提取出 3～6µg 基因组 DNA，

4.    高纯：OD260/280=1.7～1.9，长度可达 30～50 kb，可直接进行 PCR、mei切和杂交等分子生物学实验。

注意事项:

1.    如果裂解液TL、结合液CB、抑制物去除液IR有沉淀析出，可在37℃水浴溶解，摇匀后使用。

2.    开始实验前将需要的水浴先预热到70℃备用。

3.    为了最jia效果，最hao使用新鲜血液标本或者4℃存放少于3天的标本，不要使用反复冻融超过3次的标本，否则会严重降低产量，不同样品尤其疾病样品中白细胞数量差异可能非常大，因此产量的个体差异也可能非常大。

操作步骤:

第一次使用前，请先在漂洗液 WB 中加入zhi定量无水乙chun，详见瓶身的标签。提示：所有离心步骤必须在室温（15~25℃）下进行。

1.     柱平衡：向吸附柱的膜中央（吸附柱放入收集管中）加入 100μl 平衡液，

12,000 rpm 离心 1 min，弃滤液，将吸附柱重新放回收集管中。

（请使用当天处理过的柱子）

2.     材料处理：

a.       血液

取 200 μl 新鲜、冷冻或加入各种抗凝剂的血液，放入 1.5 ml 离心管。

如果全血起始量小于200 μl，则用1× PBS补足到200 μl。

如果起始量介于300 μl~1 ml之间，则需要先进行红细胞裂解操作: 在样品中加入3倍体积红细胞裂解液颠倒混匀，室温放置10 min，期间再颠倒混匀几次。13,000 rpm离心20 sec(对于1.5 ml离心管)或2,000 ~ 3,000 rpm离心5 min(对于15 ml离心管)，吸去上清，留下白细胞沉淀（如果看到的是大部分的红色细胞团，则再次重复上述红细胞裂解步骤），加入 200 μl 1× PBS，振荡至che底悬浮。

如果处理血样为禽类、鸟类、两栖类或更低级生物的抗凝血液，其红细胞为有核细胞，因此处理量仅用5 ~ 20 μl，可加1× PBS 补足到200 μl后，进行下面的裂解步骤。

b.       培养细胞

① 105 ~ 106 悬浮细胞到一个 1.5 ml 离心管；对于贴壁细胞，应该先用胰蛋白mei消化后吹打下来收集。

②  13, 000 rpm 离心 10 sec，吸弃上清，留下细胞团。

③ 加入 200 μl 1× PBS 重悬洗涤细胞，13, 000 rpm 离心 10 sec，wan全吸弃上清。

④ 再次加入 180 μl 1× PBS，振荡混匀，使细胞che底悬浮。

c.       动物组织、植物组织（例如鼠肝脑或者植物叶片）

将 20 ~ 50 mg（脾组织用量应少 10 mg）新鲜或者解冻的组织用解剖dao切成小碎块（切成小块可以提高产量）或者在液氮中研磨组织成细粉后，转入装有 180 μl 组织裂解液 TL 的 1.5 ml 离心管中，用大口径枪头吹打混匀。

d.       鼠尾

将 0.2 ~ 0.5 cm 的鼠尾巴尖(即 20 ~ 50 mg)剪碎（一定要剪 0 ~ 2cm范围内的尾巴尖，否则裂解效果不好），或者在液氮中研磨成细粉后，转入装有 180 μl 裂解液 TL 的 1.5 ml 离心管中，用大口径枪头吹打混匀。

e.       细菌

① 取 0.5 ~ 2 ml 培养菌液（最多不超过 2×109 个细胞），10, 000 rpm，

离心 30 sec，尽可能的吸弃上清，收集菌体。

起始处理量可以根据细菌密度、细胞种类、预期产量进行调整，但是离心吸附柱最大吸附能力是 30 μg 基因组 DNA，如果菌体过量超过最大吸附能力，反而会严重降低产量。

② 加入 200 μl 1× PBS 重悬，10, 000 rpm 离心 30 sec，吸弃上清。

将细胞振荡或者吹打充分重悬于 180 μl 1× PBS 中。

注意：对于较难破壁的革兰氏阳性菌，可略过 b 步骤，加入溶菌mei进行破壁处理，具体方法为：加入 180 μl 缓冲液(20 mM Tris, pH 8.0； 2 mM Na2-EDTA；1.2% Triton X~100；临用前加入终浓度为 20 mg/ ml 的溶菌mei(溶菌mei必须用溶菌mei干粉溶解在缓冲液中进行配制，否则会导致溶菌mei无活性))，37℃处理 30 min 以上。

3.     加入 20 μl 蛋白meiK 溶液，充分混匀。

a.    提取血液基因组时，只需加入 Proteinase K 混匀，即可进行下一步。

b.    提取细胞基因组时，只需加入 Proteinase K 混匀，即可进行下一步。

c.     提取动物组织、植物组织的基因组时，加入 Proteinase K 混匀后，在 56℃放置 1~3 小时，每小时颠倒混合样品 2~3 次，直至组织wan全消化溶解，再进行下一步。

d.    提取鼠尾基因组时，加入 Proteinase K 混匀后，在 56℃放置 3 小时

（也可以过夜消化），每小时颠倒混合样品 2~3 次，直至组织wan全消化溶解，再进行下一步。

e.    提取细菌基因组时，只需加入 Proteinase K 混匀，即可进行下一步。

4.     （可选步骤）加入 5 μl RNase A (100mg/ml) 溶液，振荡混匀，室温放置 5 ~ 10min。

5.     加入200 μl 结合液CB，充分振荡混匀，70℃水浴或金属浴处理10 min。

6.     冷却后加 100 μl 无水乙chun (或异丙chun)，充分振荡混匀，此时可能会出现絮状沉淀，短暂离心以去除管盖内壁水珠。

7.     将所得溶液和絮状沉淀加入一个DNA 吸附柱中，（吸附柱放入收集管中）

13, 000 rpm 离心 1 min，DNA 被吸附在膜上，倒弃滤液。

8.     加入 500 μl 抑制物去除液 IR，13, 000 rpm 离心 30 sec，倒弃滤液。

9.     加入 600 μl 漂洗液 WB（请检查是否已加入无水乙chun），13, 000 rpm

离心 30 sec，倒弃滤液。

10.  重复步骤 9 一遍。

11.  将 DNA 吸附柱放回空收集管中，13, 000 rpm 离心 2 min，尽量除去漂洗液， 以免漂洗液中残留乙chun抑制下游反应。

12.  取出 DNA 吸附柱，放入一个干净的 1.5 ml 离心管中，向吸附膜的中央加入 100 μl 洗脱缓冲液 EB （洗脱缓冲液事先在 80 ~ 100℃水浴中预热可以提高产量）， 室温放置 3 ~ 5 min，13, 000 rpm 离心 1 min。

可将第一次洗脱所得溶液重新加入离心柱中，室温放置 2 min，13, 000 rpm 离心 1 min。可以提高浓度 10%左右。

13.  DNA 可以存放在~ 20℃，如果要长时间存放，可以放置在~70℃。

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